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乙醇酸氧化酶活性檢測(cè)試劑盒(微量法)

參  考  價(jià):面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 型號(hào)

    BA1436-100

  • 品牌

    其他品牌

  • 廠商性質(zhì)

    生產(chǎn)商

  • 所在地

    上海市

更新時(shí)間:2021-11-19 15:35:19瀏覽次數(shù):160次

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100管/96樣
貨號(hào) BA1436-100 應(yīng)用領(lǐng)域 化工,生物產(chǎn)業(yè)
乙醇酸氧化酶活性檢測(cè)試劑盒(微量法)
乙醇酸氧化酶(EC1.1.3.15)是乙醇酸循環(huán)中的一種酶,也是植物光呼吸代謝中的關(guān)鍵酶,催化乙醇酸氧化生 成乙醛酸,通過測(cè)定乙醇酸氧化酶活性,可以了解植物光合和呼吸代謝的基本方法。 乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化生成乙醛酸,乙醛酸和鹽酸苯肼反應(yīng)生成乙醛酸苯腙,在324nm有特征吸收峰。

乙醇酸氧化酶活性檢測(cè)試劑盒(微量法)

產(chǎn)品貨號(hào):BA1436

 

產(chǎn)品規(guī)格:100/96

 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

乙醇酸氧化酶(EC1.1.3.15)是乙醇酸循環(huán)中的一種酶,也是植物光呼吸代謝中的關(guān)鍵酶,催化乙醇酸氧化生 成乙醛酸,通過測(cè)定乙醇酸氧化酶活性,可以了解植物光合和呼吸代謝的基本方法。 乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化生成乙醛酸,乙醛酸和鹽酸苯肼反應(yīng)生成乙醛酸苯腙,在324nm有特征吸收峰。 注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

 

產(chǎn)品組成:

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

儲(chǔ)存條件

提取液

液體60mL×2

4℃

試劑一

液體15mL×1

4℃

試劑二

粉劑×2

-20℃

試劑三

液體2mL×1

4℃

溶液的配制:

1.        試劑二:臨用前加入2.5mL雙蒸水溶解,用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

 

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、微量石英比色皿/96孔板UV板、天平、研缽/勻漿器、 冰和蒸餾水。

 

操作步驟:

一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為15~10的比例(建議稱取約0.1g 組織,加入1mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后10000g,4℃,離心10min,取上清置冰上待測(cè)。

細(xì)胞或細(xì)菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL 提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后10000g4℃,離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。

二、測(cè)定步驟

1.        紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至324nm,紫外分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

2.        將試劑一25℃預(yù)熱15min

3.        樣本測(cè)定:在微量石英比色皿/96UV板中分別加入下列試劑:

試劑名稱

測(cè)定管

空白管

試劑一(μL

130

130

蒸餾水(μL

-

10

樣本(μL

10

-

試劑二(μL

40

40

試劑三(μL

20

20

充分混勻,立即測(cè)定324nm10s190s吸光值A1A2,計(jì)算ΔA測(cè)定管=A2測(cè)定-A1測(cè)定,ΔA空白管=A2空白-A1空白,ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管。(空白管只需做1-2次)

 

GO酶活計(jì)算

1.  按微量石英比色皿計(jì)算:

(1)按蛋白濃度計(jì)算

酶活定義:每毫克蛋白每分鐘生成1nmol乙醛酸苯肼所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

GO酶活(U/mg prot=ΔA÷ε×d×V反總×109÷V×Cpr÷T=392.16×ΔA÷Cpr

(2)按樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活定義:每克組織每分鐘生成1nmol乙醛酸苯肼所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

GO 酶活(U/g 質(zhì)量)=ΔA÷ε×d×V反總×109÷V×W÷V樣總)÷T=392.16×ΔA÷W

(3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活定義:每萬細(xì)胞每分鐘生成1nmol乙醛酸苯肼所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

GO酶活(U/104 cell=ΔA÷ε×d×V反總×109÷V×500÷V樣總)÷T=0.784×ΔA

ε:乙醛酸苯腙毫摩爾消光系數(shù):17000L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應(yīng)總體積,2×10-4L;V樣:反應(yīng)中樣本體積,0.01mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL,蛋白濃度自行測(cè)定;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,3min500500萬個(gè)細(xì)胞;109:?jiǎn)挝粨Q算系數(shù),1mol=109nmol。

2.  96UV板計(jì)算:

將上述公式中的d-1cm改為d-0.6cm96UV板光徑)進(jìn)行計(jì)算即可。

 

注意事項(xiàng):

1.        測(cè)定之前進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn),若吸光值A1>1,請(qǐng)將樣本用提取液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂屧贉y(cè)定,并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

2.        色素含量較高的樣本,可在提取酶時(shí)加活性炭吸附。

3.        空白管為檢測(cè)各試劑組分質(zhì)量的檢測(cè)孔,正常情況下,其OD值變化不超過0.02。

 

實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

1.        稱取約0.1g三葉草組織,加入1mL提取液,進(jìn)行冰浴勻漿,然后10000g4℃,離心10min,取上清進(jìn)行檢測(cè),使用微量石英比色皿測(cè)得ΔA測(cè)定管=A2測(cè)定-A1測(cè)定=0.8956-0.7839=0.1117,ΔA空白管=A2空白-A1空白=0.0853-0.077=0.0083ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管=0.1117-0.0083=0.1034,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:GO酶活(U/g 質(zhì)量)=392.16×ΔA÷W=405.4934 U/g 質(zhì)量。

2.        稱取約0.1g菠菜組織,加入1mL提取液,進(jìn)行冰浴勻漿,然后10000g4℃,離心10min,取上清稀釋2倍進(jìn)行檢測(cè),使用微量石英比色皿測(cè)得ΔA測(cè)定管=A2測(cè)定-A1測(cè)定=0.9286-0.8105=0.1181,ΔA空白管=A2空白-A1空白=0.0853-0.077=0.0083,ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管=0.1181-0.0083=0.1098,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:GO酶活(U/g質(zhì)量)=392.16×ΔA÷W×2(稀釋倍數(shù))=861.1834 U/g質(zhì)量。

 


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