真菌基因組DNA提取試劑盒 

產品貨號：26244

 產品規(guī)格：50T/100T

 產品簡介：

 真菌基因組DNA提取試劑盒 真菌是具有真核和細胞壁的異養(yǎng)生物，種屬很多，已報道的屬達1萬以上，種超過10萬個。真菌通常又分為 三類，即酵母菌、霉菌和蕈菌（大型真菌）。對于酵母菌和霉菌，可以用玻璃珠處理，而對于大型真菌，可直接用液氮研磨。經(jīng)過前期處理的菌液，用硅質膜吸附，即可得到高純度的基因組。提取純化后的DNA，可以直接用于PCR/Real time-PCR，sequencing，Southern blot，mutant analysis，SNP等下游應用實驗。產品組成：產品組成 50T 100TRNase A 1ml 1ml×2蛋白酶 K 1ml 1ml×2玻璃珠 6g 11g溶液 A 10ml 20ml溶液 B 10ml 20ml漂洗液 15ml 15ml×2洗脫液 10ml 20ml吸附柱 50個 100個收集管 50個 100個

 操作步驟（僅供參考）： 

使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶體上的標簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

 1. 樣品的處理： 

1）對于酵母菌，取1-2ml培養(yǎng)好的菌液，離心收集，棄上清。加入200ul溶液A，加入20ul RNase A，再加入100mg玻璃珠，在高速振蕩器上振蕩，約5-10min。

 2）霉菌(孢子也可相同處理)：取50-100mg菌絲，加200ul溶液A，用玻璃研磨器適當研磨分散菌絲，加入20ul RNaseA，再加入100mg玻璃珠，在高速振蕩器上振蕩，約30min。

 3）大型真菌（如蘑菇等）：稱取50-100mg樣品，倒入適量的液氮，立即研磨重復3次，使樣品研成粉末（如無液氮，可加200ul溶液A后用玻璃研磨器適當研磨），加200ul溶液A，加入20ul RNase A，再加入100mg玻璃珠，在高速振蕩器上振蕩，約5min。

 2. 加入20ul的蛋白酶K（10mg/ml），充分混勻，55℃水浴消化30min，消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次。12000rpm離心2min。將上清轉移到一個新的離心管中。如有沉淀，可再次離心。 

3. 在上清中加入200ul溶液B，充分混勻。如出現(xiàn)白色沉淀，可放55℃水浴5min，沉淀即會消失，不影響后續(xù)實驗。如溶液未變清亮，說明樣品消化不*，可能導致提取的DNA量少及不純，還有可能導致上柱后堵柱子，請增加消化時間。

 4. 再加入200ul無水乙醇，充分混勻，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，不影響DNA的提取，將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中，放置2分鐘。

 5. 12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

 6. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

 7. 向吸附柱中加入600ul漂洗液，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

 8. 12000rpm離心2min，將吸附柱置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實驗如酶切、PCR等。

 9. 將吸附柱放入一個干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加50-200ul經(jīng)65℃水浴預熱的洗脫液，室溫放置5min， 12000rpm離心1min。

 10. 離心所得洗脫液再加入吸附柱中，室溫放置2min，12000rpm離心2min，即可得到高質量的基因組DNA。

 注意事項：

1. 由于真菌種類萬千，對于一些特別難處理的真菌，可用液氮研磨，再用玻璃珠振蕩，蛋白酶K處理，一般都可以得到一定量的基因組DNA，如電泳檢測很弱，一般PCR都會有較好結果。

2.  若溶液A或溶液B中有沉淀，可在55℃水浴中重新溶解。

3.  如果DNA提取量很少，可加長玻璃珠處理時間，如果提取DNA成彌散短條帶，可減少玻璃珠處理時間

4. 洗脫緩沖液的體積最好不少于50ul，體積過小會影響回收效率；洗脫液的pH值對洗脫效率也有影響，若需要用水做洗脫液應保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調至此范圍)，pH值低于7.0會降低洗脫效率；DNA產物應保存在-20℃，以防DNA降解。

5.  DNA濃度及純度檢測：得到的基因組片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關。回收得到的片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。DNA應在OD260處有顯著吸收峰， OD260值為1相當于大約50μg/ml雙鏈DNA、40μg/ml 單鏈DNA。OD260/OD280比值應為1.7-1.9，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會偏低，因為pH值和離子存在會影響光吸收值，但并不表示純度低。

   保存條件：室溫(15℃-25℃) 干燥保存，復檢期12個月，2-8℃保存時間更長。