DNA病毒基因組提取試劑盒

產(chǎn)品貨號：10268

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

DNA病毒基因組提取試劑盒適合于從血清、細胞上清、淋巴液中提取DNA病毒基因組，不適合于RNA病毒基因組的提取。使用本試劑盒提取的基因組DNA可用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、文庫構(gòu)建、Southern雜交等實驗。

產(chǎn)品組成：

操作步驟(僅供參考)：

使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。 

1. 取病毒上清液0.5ml，12000rpm離心5min，盡量吸盡上清使用，棄去沉淀。

2. 向病毒上清中加入20ul的蛋白酶K（10mg/ml），充分混勻，65℃消化10-20min，期間可顛倒離心管混勻數(shù)次。

3. 向管中加入500ul溶液V，充分混勻。再向管中加入400ul無水乙醇，充分混勻，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，不影響DNA的提取，可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中，靜置2min。（吸附柱的最大容積為750ul，可分兩次加入。一次吸附完離心后再將余下的混合液體加入柱中靜置離心。）

4. 12000rpm離心2min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

5. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

6. 向吸附柱中加入600ul漂洗液，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

7. 12000rpm離心2min，將吸附柱置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實驗如酶切、PCR等。

8. 將吸附柱放入一個干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加50ul-100ul經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的洗脫液，室溫放置5min，12000rpm離心1min。

9. 離心所得洗脫液再加入吸附柱中，室溫放置2min，12000rpm離心2min，即可得到高質(zhì)量的病毒基因組DNA。

注意事項：

1. 蛋白酶K需放置-20℃保存。

2. 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會導(dǎo)致提取的DNA片段較小且提取量也下降。

3. 若溶液V中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解再使用，不影響效果。

4. 洗脫緩沖液的體積最好不少于50ul，體積過小會影響回收效率。洗脫液的pH值對洗脫效率也有影響，若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)至此范圍)，pH值低于7.0會降低洗脫效率。 DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防DNA降解。

5. DNA濃度及純度檢測：得到的基因組DNA片段的大小與病毒的保存條件和種類等因素有關(guān)。D₂₆₀值為1.0相當于大約50ug/ml雙鏈DNA、40ug/ml單鏈DNA。OD₂₆₀/OD₂₈₀比值應(yīng)為1.7-1.9，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會偏低，因為pH值和離子存在會影響光吸收值，但并不表示純度低。

6. 如果病毒含量過低，最后提取的基因組DNA電泳可能無法檢測到，但 PCR等其他實驗還會有結(jié)果。

有效期：室溫(15℃-25℃) 干燥保存，復(fù)檢期12個月，2℃-8℃保存時間更長。