細胞核提取試劑盒

產(chǎn)品貨號：10258

產(chǎn)品包裝：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

細胞核提取試劑盒用于從動物細胞或組織中分離出完整而純化的細胞核。適合于動物軟組織（肝或腦組織）和硬組織（肌肉）以及培養(yǎng)細胞的細胞核的制備。其制備物產(chǎn)量高，可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組學等的研究。

產(chǎn)品組成：

操作步驟：
1. 樣本處理

a. 組織勻漿：稱取100~200mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等，PBS或生理鹽水沖洗，洗凈血水，濾紙吸干，用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內(nèi)。加入1.0 mL預冷的Lysis Buffer，再加入50µL Reagent A，0℃冰浴中上下研磨組織20次；有未研磨開的組織，可用雙層紗布過濾。

b. 培養(yǎng)細胞勻漿：消化細胞，PBS洗滌，800g離心5~10min收集細胞，計數(shù)。每次提取需要5 ×10⁷個細胞，加入1.0 mL冰預冷的Lysis Buffer重懸細胞，再加入50µL Reagent A，將細胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi)，0℃冰浴研磨細胞20~30次。

2. 將組織或細胞勻漿物轉(zhuǎn)移到1.5mL離心管中，4℃，700g離心5min。細胞核沉淀在收集管底部，棄上清。加入 0.5 mL 冰預冷的 Lysis Buffer 重懸沉淀。

3. 取另一新離心管內(nèi)加入0.5 mL Medium Buffer，吸取上一步的重懸液，沿管壁小心地加入到此離心管中，置于Medium Buffer之上，4℃，700 g 離心5min。細胞核沉淀在管底。

4. 棄上清，在細胞核沉淀中加入0.5 mL Lysis Buffer重懸細胞核沉淀，1000g離心10min ，棄上清，得到較純的細胞核沉淀。

5. 用50-100µL Store Buffer或合適的反應緩沖液重懸細胞核沉淀，立即使用或-70℃保存。

注意事項：

1. 為保證獲得完整的細胞核，務必做到：第一，全程低溫操作；第二，快速；第三，在不破壞亞細胞器的情況下破碎細胞，這是制備細胞核的最關鍵環(huán)節(jié)。與組織塊相比，培養(yǎng)細胞特別是貼壁培養(yǎng)細胞在用玻璃勻漿器勻漿時較難破壁，因而要選用小容量玻璃勻漿器、間隙嚴密的研杵上下研磨培養(yǎng)細胞。

2. 以離心力g計算正確的離心速度，不同的離心機可據(jù)此精確計算離心速度。

3. 進行Western Blot和2D-膠電泳，可直接加入上樣緩沖液裂解細胞核。

轉(zhuǎn)速與離心力換算:

G＝1.11×(10-5)×R×[rpm]² 

G為離心力，一般以ｇ（重力加速度）的倍數(shù)來表示；[rpm]²即：轉(zhuǎn)速的平方； R為半徑，單位為厘米。

保存條件：

短期使用可4℃儲存，長期保存請置于-20℃或-70℃。