Tricine-SDS-PAGE凝膠配制試劑盒

產(chǎn)品貨號：15195

產(chǎn)品規(guī)格：30T/150T

產(chǎn)品簡介：

聚丙烯酰胺凝膠電泳 (Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gelelectrophoresisSDS-PAGE)原理在于聚丙烯酰胺凝膠為網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，具有分子篩效應(yīng)。它有兩種形式：非變性聚丙烯酰胺凝膠及 SDS-聚丙烯酰胺凝膠；非變性聚丙烯酰胺凝膠，在電泳的過程中，蛋白質(zhì)能夠保持完整狀態(tài)，并依據(jù)蛋白質(zhì)的分子量大小、蛋白質(zhì)的形狀及其所附帶的電荷量而逐漸呈梯度分開，主要用于分離蛋白質(zhì)和寡核苷酸。常規(guī) SDS-PAGE 凝膠電泳適用于分離大分子蛋白，對于小分子量的蛋白或多肽，分辨率大大降低。

尚寶生物 Tricine-SDS-PAGE電泳能夠較好的分離10KD以下的蛋白或多肽，是電泳法分離多肽的主要方法，30T一般可以配制30～35塊膠，具體配制的量應(yīng)根據(jù)器具大小決定。電泳分離后可直接考馬斯亮藍(lán)染色、銀染等。

產(chǎn)品組成：

操作步驟(僅供參考)：

• 配制10%過硫酸銨(APS)：直接在0.3g Ammonium Persulfate中加入3ml蒸餾水，充分溶解，分裝成小份儲存于-20℃或4℃。注意：一般用1.5mlEP管分裝成0.5-1ml每支，-20℃保存，每支使用2-3次即棄用。短期使用時，可保存于4℃，1周有效。
• 根據(jù)目的蛋白分子量大小選擇合適的凝膠濃度，按照附表配制分離膠：

①將不同體積的蒸餾水、49.5%T 6%C、Gel buffer、Glycerol加入到離心管中充分混合。

②加入10%APS和TEMED，立即渦旋混勻5～10s，以使溶液充分混勻。

③在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液(1mm mini-gel，分離膠溶液加約4ml），然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1～3cm的水層，使凝膠表面保持平整。

④靜置，待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個清晰的界面表示凝膠已聚合。

• 根據(jù)目的蛋白分子量大小選擇合適的凝膠濃度，按照附表配制夾層膠：

①去除覆蓋在分離膠上的水層，用濾紙將殘留的水盡量吸去。

②將不同體積的蒸餾水、49.5%T 3%C和Gel buffer加入到離心管中混合。

③加入10%APS和TEMED，立即渦旋混勻5～10s，以使溶液充分混勻。

④將適量的夾層膠溶液迅速加至分離膠的上面(對于1mm的mini-gel，夾層膠溶液加約1ml)，然后在夾層膠溶液上輕輕覆蓋一層1～2cm的水層，使凝膠表面保持平整。

⑤靜置，待夾層膠和水層之間出現(xiàn)一個清晰的界面表示凝膠已聚合。

• 根據(jù)目的蛋白分子量大小選擇合適的凝膠濃度，按照附表配制濃縮膠：

①去除覆蓋在夾層膠上的水層，用濾紙將殘留的水吸去。

②將不同體積的雙蒸水、49.5%T 3%C和Gel buffer加入到離心管中混合。

③加入10%APS和TEMED，立即渦旋混勻5～10s，以使溶液充分混勻。

④將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。

⑤靜置，待凝膠聚合后，小心地拔出梳子，避免破壞加樣孔。進(jìn)行電泳操作。

• 電泳

將電泳槽置于4℃或冰水浴中，外槽加入陽極緩沖液，內(nèi)槽加入陰極緩沖液，30V預(yù)電泳10min，將處理好的樣品加入點樣孔，30V電泳1h，100V電泳至溴酚藍(lán)到達(dá)膠底部后停止電泳，進(jìn)行后續(xù)的考馬斯亮藍(lán)染色或電轉(zhuǎn)。

附表 Tricine-SDS-PAGE 凝膠配方表

注意事項：

• 過硫酸銨配制成10%APS溶液后應(yīng)當(dāng)-20℃保存，用2~3次，亦可4℃保存幾天。
• TEMED易揮發(fā)，使用后請蓋緊瓶蓋。另外凝膠凝聚的速度和溫度及光照關(guān)系密切?？赏ㄟ^適當(dāng)調(diào)節(jié)TEMED 的用量，控制在不同的室內(nèi)環(huán)境下凝膠凝聚的速度。
• 配制聚丙烯凝膠的過程中，如果室溫較低，可以置于37℃放置，加速凝固。在液體混勻的時候應(yīng)盡量避免氣泡的產(chǎn)生。
• 在分離膠上層加蒸餾水時要緩慢，速度不宜過快。
• 49.5%T 3%C 和 49.5%T 6%C為不同比例的Acr-Bis，有輕微神經(jīng)毒性，請小心操作。

有效期：6個月有效。