離心柱式血液基因組提取試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：28103

產(chǎn)品規(guī)格：50 次/100 次/200 次

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

       離心柱式血液基因組提取試劑盒采用高鹽法提取血液中的基因組 DNA，可大限度去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。提取 的基因組 DNA 的片段大，純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。

  使用離心柱式血液基因組回收的 DNA 可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、文庫(kù)構(gòu)建、Southern 雜交等實(shí)驗(yàn)。 自備試劑：無(wú)水乙醇。使用前 Buffer PW50 次加入 39ml 無(wú)水乙醇/100 次加入 77ml 無(wú)水乙醇/200 次加入 144ml 無(wú)水乙醇

包裝清單：   

操作步驟：

以下步驟以提取 2mL 血液中基因組為例，具體實(shí)驗(yàn)可根據(jù)血液量等比例減少。

1. 于離心管中加入 2mLBuffer A 和 2mL 預(yù)冷的超純水。上下顛倒 6-8 次，冰上孵育 2-3min。

2. 3500rpm 離心 15min，棄上清。

3. 加入 150μl Buffer B，劇烈渦旋 30-60s 至沉淀重新散裂，加入 5μl Proteinase K 溶液，充分顛倒混勻，56℃放 置 10 min，其間顛倒混勻數(shù)次，溶液應(yīng)變清亮（如溶液未*變清亮，請(qǐng)延長(zhǎng)裂解時(shí)間至溶液清亮為止）。

注意：加入緩沖液 Buffer B 時(shí)可能會(huì)產(chǎn)生白色沉淀，一般 37℃放置時(shí)會(huì)消失，不會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變 清亮，說(shuō)明細(xì)胞裂解不*，可能導(dǎo)致提取 DNA 量少和提取出的 DNA 不純，需等比例補(bǔ)加 Buffer B 及 Proteinase K。當(dāng)血液體積≤200μl 且沒(méi)有采用紅細(xì)胞裂解處理，或是樣本儲(chǔ)存條件不佳，水浴后顏色可能為深褐色，注意溶 液中沒(méi)有團(tuán)塊等沉淀。

4. 加入 3 倍體積的 Buffer PG（約 0.45mL），渦旋充分混勻。

5. 柱平衡：向已裝入收集管（Collection Tubes）中的吸附柱（Spin Columns）中加入 200μl Buffer PS，12000 rpm 離心 1 分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

6. 將步驟 3 所得溶液加入到已裝入收集管的吸附柱中，室溫放置 2 分鐘，12000 rpm 離心 1 分鐘，倒掉收集管 中的廢液，將吸附柱放回收集管中（如步驟 3 所得溶液體積過(guò)大，可分次加入吸附柱中，12000 rpm 離心 1 分鐘，棄流穿液）。

7. 向吸附柱中加入 450 μl Buffer PW（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇），12000rpm 離心 1 分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。

注意：如果純化的 DNA 用于鹽敏感的實(shí)驗(yàn)（例如平末端連接或直接測(cè)序），建議加入 Buffer PW 靜置 2-5 分鐘 再離心。

8. 重復(fù)步驟 6。

9. 12000 rpm 離心 1 分鐘，倒掉收集管中的廢液。 注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶促反應(yīng)（酶切、PCR 等）。

10. 將吸附柱放到一個(gè)新的 1.5 ml 離心管（自備）中，向吸附膜中間位置懸空滴加 50μlBuffer EB，室溫放置 2 分鐘。12000 rpm 離心 1 分鐘，收集 DNA 溶液。-20℃保存 DNA。

注意：

1) 洗脫液的 pH 值對(duì)于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液，應(yīng)保證其 pH 值在 7.0-8.5 之間（可以用 NaOH 將水的 pH 值調(diào)到此范圍）。

2) 為了提高基因組提取量，可將離心得到的溶液重新加到吸附柱中，室溫放置 2 分鐘，12000 rpm 離心 1 分鐘。

3) 洗脫體積不應(yīng)小于 30μl，體積過(guò)少會(huì)影響回收效率。

注意事項(xiàng)：

1. *使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說(shuō)明在 Buffer PW 中加入無(wú)水乙醇。

2. 若 Buffer B 中有沉淀，可在 37℃水浴中重新溶解，搖勻后使用。

3. 所有離心步驟均可室溫下進(jìn)行。