乳酸檢測試劑盒（乳酸脫氫酶比色法）

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1698

產(chǎn)品規(guī)格：50T

產(chǎn)品簡介：

乳酸(Lactic acid，LD)又稱2-羥基丙酸是一種化合物，是一種含有羥基的羧酸，分子式是C₃H₆O₃，參與生物化學(xué)很多反應(yīng)過程。乳酸檢測有化學(xué)氧化法、酶催化法、電化學(xué)法、酶電極感應(yīng)器法。其中，酶催化法是使用乳酸脫氫酶(LDH)催化乳酸氧化，生成丙酮酸和NADH，通過分光光度法或熒光光度法測定NADH的生成量，進(jìn)而計(jì)算出乳酸含量。

乳酸檢測試劑盒(乳酸脫氫酶比色法)其檢測原理是在NAD存在條件下，乳酸脫氫酶(LDH)催化乳酸生成丙酮酸，同時(shí)生成NADH。在堿性條件下顯色劑與丙酮酸生成復(fù)合物，并使平衡偏向乳酸氧化為丙酮酸的方向，驅(qū)動(dòng)反應(yīng)完成，生成的NADH與乳酸為等量摩爾。通過分光光度比色法測定340nm處吸光度，據(jù)此通過比色分析就可以計(jì)算出LD水平。該試劑盒可用于檢測細(xì)胞或組織的裂解液或勻漿液、血漿、血清等樣品中內(nèi)源性的乳酸含量。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

需自備的儀器和用品：

離心管或小試管、蒸餾水、水浴鍋或恒溫箱、比色杯、分光光度計(jì)。

操作步驟：

1. 準(zhǔn)備樣品：

血漿、血清、尿液及其他體液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定，尿液通常也可以直接用于測定，-20℃凍存。

細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液，如果有必要需進(jìn)行適當(dāng)勻漿，低速離心取上清，-20℃凍存，用于LD的檢測。

高濃度樣品：如果樣品中含有較高濃度的LD，可以使用原有的裂解液或PBS等進(jìn)行稀釋，如雞血清、血漿可稀釋5～10倍后檢測。

2. 配制標(biāo)準(zhǔn)品工作液：取乳酸標(biāo)準(zhǔn)(20mmol/L)0.1ml溶解于0.3ml乳酸標(biāo)準(zhǔn)稀釋液，使?jié)舛冗_(dá)到5mmol/L，即為標(biāo)準(zhǔn)品工作液-乳酸標(biāo)準(zhǔn)(5mmol/L)。4℃避光保存2個(gè)月有效。

3. LD檢測：按照下表設(shè)置空白管、對(duì)照管、標(biāo)準(zhǔn)管、測定管，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣

泡。如果樣品中的LD濃度過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定。樣品的檢測最好能設(shè)置平行管。

4. 用分光光度計(jì)檢測，以蒸餾水調(diào)零，比色杯光徑1.0cm，讀取空白管、對(duì)照管、標(biāo)準(zhǔn)管、測定管的340nm吸光度(即A_空白、A_對(duì)照、A_{標(biāo)準(zhǔn)}、A_測定)，一般應(yīng)數(shù)小時(shí)內(nèi)檢測完畢。 

計(jì)算結(jié)果： 

血清、血漿、尿液、腦脊液乳酸(mmol/L)=｛(A_測定?A_對(duì)照)/(A_{標(biāo)準(zhǔn)}?A_空白)｝×5

組織乳酸(mmol/g)=｛(A_測定?A_對(duì)照)/(A_{標(biāo)準(zhǔn)}?A_空白)｝×5/待測樣品蛋白濃度(g/L)

式中：A_測定=測定管的吸光度值

A_對(duì)照=對(duì)照管的吸光度值

A_{標(biāo)準(zhǔn)}=標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度值

A_空白=空白管的吸光度值

參考區(qū)間： 

健康成年人安靜狀態(tài)空腹靜脈血      0.6～2.2mmol/L

健康成年人安靜狀態(tài)空腹動(dòng)脈血      0.3～1.47mmol/L

健康成年人尿液乳酸排出量       5.5～22mmol/d

新生兒毛細(xì)血管血                  1.2～4.4mmol/L

0～16 兒童腦脊液                  1.1～2.8mmol/L

注意事項(xiàng)：

1. 本法適用于自動(dòng)分析儀，分別監(jiān)測測定管和標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度升高速率，計(jì)算乳酸的濃度。

2. 如果沒有分光光度計(jì)，也可以使用酶標(biāo)儀測定。

3. 抗凝劑用肝素鈉-氟化鈉較好?？鼓獦悠分糜诒≈兴蜋z，盡快分離出血漿等。

4. 草酸抗凝劑對(duì)LDH有一定的抑制作用。

5. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期：6個(gè)月有效。