快速高爾基染色試劑盒（神經(jīng)元和膠質(zhì)細胞）

產(chǎn)品貨號：BA1808

產(chǎn)品規(guī)格：6×125ml

產(chǎn)品簡介：

Golgi-Cox浸染法是研究神經(jīng)元和膠質(zhì)細胞正常和非正常形態(tài)有效的方法之一。 使用Golgi技術(shù)，在藥物處理過的動物腦中和因神經(jīng)疾病死亡的病人腦中發(fā)現(xiàn)了神經(jīng)樹突和樹突微小的形態(tài)改變。然而Golgi染色法的不可靠性且費時已成為這種方法廣泛應(yīng)用的障礙。

快速高爾基染色試劑盒（神經(jīng)元和膠質(zhì)細胞）是根據(jù)Ramón-Moliner，Glaser和Van der Loos所闡述的方法原理設(shè)計的。該試劑盒不僅極大地改進并簡化了Golgi-Cox技術(shù)，而且被證實在顯示神經(jīng)元和膠質(zhì)細胞，尤其是樹突棘的形態(tài)細節(jié)極為靈敏可靠。尚寶生物生產(chǎn)的快速高爾基染色試劑盒已被廣泛用于數(shù)種動物腦組織染色。

產(chǎn)品組成：

需要但未包括在試劑盒里的物品

1. 雙蒸水或Milli-Q水

2. 塑料/玻璃管或瓶 、琉璃樣品回收器、天然毛畫筆、滴瓶、塑料鑷子

3. 組織學(xué)耗材：

明膠包被的顯微鏡載玻片

蓋玻片

染色罐

乙醇

二甲苯

樹膠封片劑

光學(xué)顯微鏡

組織制備

使用此試劑盒前必須仔細閱讀以下說明??！ l

l 所用容器（最好為塑料材質(zhì)）必須用蒸餾水沖洗干凈。 l

l 當溶液A和溶液B存在時不能使用金屬器具。 l

l 保持容器密封。 l

l 用溶液A和溶液B處理的組織和切片，應(yīng)該避光。 l

l 除非特別指出，以下流程需在室溫下完成。

1. 殺死動物之前對實驗動物進行深度麻醉。應(yīng)盡快地從顱骨中取出動物的腦，但操作時必須非常小心以免損傷或壓迫組織。

注意 l

l 除非wan quan必要，不要對動物進行灌注。如果確實需要對動物進行灌注（用4%的多聚甲醛處理不要超過5分鐘），一定不要對組織進行后固定處理。 l

l 體積較大的腦部樣本包括大鼠腦部應(yīng)該用鋒利的刀片切成大約10mm厚的塊狀。重要提示！

2. 用雙蒸水或Milli-Q水快速沖掉組織表面的血液。

3. 把組織浸泡在由溶液A和B等體積混合的浸漬液中，室溫下黑暗保存兩周*。浸泡6個小時以后或次日更換新的浸漬液。

*對于大多數(shù)情況浸泡2周是足夠的。然而，不同的組織類型及組織的大小不同可能需要延長或縮短浸泡時間來達到最佳效果。對于每種類型的組織的浸泡時間應(yīng)該通過試驗獲得，但是對于大多數(shù)組織浸泡3周是足夠的。注意，延長浸泡時間可能增加染色背景。

注意 l 

l 溶液A和溶液B的混合液至少在用之前24小時配制，并不能攪拌。 l

l 采用以上方案則不會產(chǎn)生沉淀是關(guān)鍵的。 l

l 制備好的浸泡液在用之前室溫黑暗保存可長達一個月。 l

l 每m³待研究組織至少用5ml浸泡液。注意用較少的浸泡液可能降低染色的靈敏性和可靠性。 l

l 為取得最佳結(jié)果，在浸泡期間每周兩次對裝有組織的容器可輕輕地左右旋渦（一定不要晃動?。酌腌?。

Warning

溶液A和B（含有HgCl?，重鉻酸鉀和鉻酸鉀）接觸皮膚是有毒的，如果吞咽可能是致命的。實驗應(yīng)該在化學(xué)通風(fēng)櫥中完成。當操作這些試劑時應(yīng)穿戴防護服，手套和防護面具/眼鏡。不要把溶液A和B的廢棄物倒進水槽中！ 

把溶液A和B的廢棄物收集起來放到一個瓶子中，致電安全辦公室或有執(zhí)照的專業(yè)廢物處理服務(wù)的部門處理些材料。

4. 轉(zhuǎn)移組織到溶液C中室溫黑暗至少72小時（可長達1周）。24小時后或次日至少更換一次溶液。

5. 在-20℃到-22℃的條件下用冷凍切片機將組織切成100-200um厚的薄片，也可用其它型號的顯微鏡薄片切片機包括滑動切片機和振動切片機。用樣本回收器把樣本轉(zhuǎn)移到含有溶液C的明膠包被的顯微鏡載玻片上。載玻片上多余的溶液用吸管吸走并用濾紙吸干（載玻片上的溶液必須盡可能地吸干否則切片將從載玻片上脫落下來）。切片可以室溫下自然風(fēng)干（不能用電風(fēng)扇或電熱板使其干燥）。為取得最佳結(jié)果，應(yīng)盡快地完成切片，制備好的切片如果保存于載玻片盒中，室溫黑暗條件下最長可保存3天。

注意 l

l 為避免組織受冷凍切片機的損害，并盡可能地保持細胞形態(tài)學(xué)，組織在進行冷凍切片之前應(yīng)快速冰凍。比如，組織應(yīng)按以下描述盡可能地快速冰凍：把組織放在一個塑料匙中慢慢地浸入含有干冰的異戊烷中預(yù)冷（為取得最佳結(jié)果，溫度應(yīng)保持在-70℃以下并且浸入過程用時1分鐘，越慢越好）。組織完quan浸入異戊烷之后，使組織在異戊烷中浸幾秒鐘，然后再放置干冰上1分鐘以確保組織能很好地冰凍。進行切片之前不要讓組織融化。 l

l 切片機的型號可能會有不同，但所用的型號確保能切厚的切片（比如100um）。 l

l 如果冰凍切片機只有一個溫度設(shè)置，那么在進行切片之前把溫度設(shè)置在-22℃至少4個小時。如果有兩個溫度設(shè)置，那么設(shè)置槽內(nèi)溫度比樣本溫度低1℃。請注意大多數(shù)情況下-22℃是最佳的溫度，然而，為了更順利地切出切片并沒有破碎，不同型號的切片機和不同的組織可能需要更高或更低的槽內(nèi)溫度。 l

l 對于用冰凍切片機切片，以下幾點提示是有益的：1）用蒸餾水把組織固定于樣本盤上，但必須確保組織沒有融化（可以在干冰上完成）。組織可以被固定在任何類型的組織冰凍介質(zhì)上包括OCT，但要避免切斷介質(zhì)。不要在OCT中包埋組織，如果組織確實需要包埋，用TFM替代OCT。2）組織固定到樣本盤后，放置組織于干冰上10分鐘，然后立即把固定有樣本的樣本盤安裝到冰凍切片機上，等5分鐘之后進行切片。3）切好的一些切片（不要使用防卷板），如果組織溫度過低比如切片顯示出與刀片平行的裂縫，先等幾分鐘再進行下一個切片，否則可繼續(xù)切。 l

l 浸泡的腦可用瓊脂糖或明膠包埋然后用冰凍切片機切片。然而收集切片時（充滿切片槽），必須使用溶液C。否則切片易干燥裂紋。 l

l 如果用滑動切片機切浸泡的組織，樣本盤和刀片都需維持在較低的溫度（0℃以下）按照操作手冊的描述切片固定在含有溶液C的載玻片上是重要的。

VI. 染色步驟 

在染色過程中和蓋蓋玻片之前的任何一步都不要讓切片變干

1. 用雙蒸水或Milli-Q水沖洗切片兩次，每次4分鐘。

2. 把切片置于由1份溶液D，1份溶液E和2份的雙蒸水或Milli-Q水組成的混合液中10分鐘。

比如：溶液D    10ml

溶液E    10ml

雙蒸水   20ml

注意 l

l 工作液最好現(xiàn)配現(xiàn)用，每100ml工作液最多用于100張切片（比如小鼠腦）， 根據(jù)切片的大小。 l

l 盛有工作液的瓶子或染色罐必須蓋好蓋子防止試劑蒸發(fā)。 l

l 為取得最佳結(jié)果，孵育期間應(yīng)頻繁攪拌工作液。

3. 用蒸餾水或Milli-Q水沖洗切片兩次，每次4分鐘（蒸餾水應(yīng)頻繁更換新的）。

4. 用結(jié)晶紫或硫堇對切片進行復(fù)染（可選步驟）。

注意 l

l 對于復(fù)染，延長步驟3的時間，比如用沖洗4次每次5分鐘代替原來的沖洗2次每次4分鐘，或者更長的時間。

5. 在50%，75%和95%的乙醇中對切片進行脫水，每個濃度梯度脫水4分鐘（不要跳過任何一個步驟）。

6. 然后在無水乙醇中對切片進行脫水，4次，每次4分鐘（不要延長時間）。

7. 在二甲苯中透明，3次，每次4分鐘，并且用樹脂封片劑對蓋玻片進行封片。

注意 l

l 蓋玻片之前切片可以暫時存于二甲苯中幾個小時。 l

l 為取得最佳結(jié)果，最好用未稀釋的封片劑。 l

l 用Golgi染色的切片無論何時都應(yīng)避光保存。

注意事項

1. 快速高爾基染色試劑盒（神經(jīng)元和膠質(zhì)細胞）僅用于體外研究，不能用于診斷或其它應(yīng)用。

2. 試劑盒所包含有試劑是有毒的，吸入或接觸皮膚是有害的，如果吞咽可能是致命的。不要用嘴吸。避免吸入和接觸皮膚和眼睛。如果接觸，立即用大量的水沖洗并求助醫(yī)生。

3. 在化學(xué)通風(fēng)櫥下完成實驗。操作這些試劑時須穿戴合適的防護服，手套和眼睛和面部防護罩，完成實驗之后把手沖洗干凈。