乳酸脫氫酶（LDH）檢測(cè)試劑盒（二硝基苯肼微板法）

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1696

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH或LD)屬于氧化還原酶，能夠催化氫氧原子或電子從一種底物轉(zhuǎn)移到另一種底物上乳酸脫氫酶是糖酵解和糖異生的一個(gè)極其重要的酶，含有鋅離子，廣泛分布于人和動(dòng)物組織、植物和微生物，能可逆的催化乳酸 (L)和丙酮酸(P)之間的氧化還原反應(yīng)。其反應(yīng)公式：乳酸+NAD + →丙酮酸+NADH + H 。其中：L→P為正向反應(yīng)；P→L為逆向反應(yīng)。

乳酸脫氫酶(LDH)檢測(cè)試劑盒(二硝基苯肼微板法)其檢測(cè)原理是以NAD為受氫體，乳酸脫氫酶催化乳酸脫氫生成丙酮酸，丙酮酸與二硝基苯肼反應(yīng)生成丙酮酸二硝基苯腙，后者在堿性溶液中呈棕紅色，顏色深淺與丙酮酸濃度呈正比，酶標(biāo)儀檢測(cè)440nm處吸光度，通過(guò)測(cè)得的丙酮酸含量計(jì)算酶的活性。該方法的優(yōu)點(diǎn)是：1、試劑原料容易獲得；2、較為經(jīng)典的方法；3、適用于手工操作。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1. 蒸餾水

2. 離心管

3. 恒溫箱或水浴鍋

4. 酶標(biāo)儀、96孔板

操作步驟：

1. 準(zhǔn)備樣品：

①血漿、血清樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備，10倍稀釋后可以用于本試劑盒的測(cè)定，室溫保存3天，用于LDH的檢測(cè)。

②細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)細(xì)胞或組織進(jìn)行勻漿，低速離心取上清，室溫保存3天，用于LDH的檢測(cè)。

③(選做)樣品準(zhǔn)備完畢后可以用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度，以便于后續(xù)計(jì)算單位蛋白重量組織或細(xì)胞內(nèi)的LDH含量。

2. 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：用LDH Assay buffer準(zhǔn)確稀釋丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(5mmol/L)至0.5mmol/L，按下表稀釋系列標(biāo)準(zhǔn)品。

3. 配制堿性顯色工作液：按堿性顯色液：蒸餾水=2:3的比例混合，即為堿性顯色工作液。

4. LDH酶促：按照下表設(shè)置空白管、標(biāo)準(zhǔn)孔、對(duì)照孔、測(cè)定孔，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中酶活性過(guò)高，可減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再行測(cè)定。

5. LDH測(cè)定：混勻，室溫放置5min，酶標(biāo)儀440nm處測(cè)定各孔吸光度(記為A空白、A標(biāo)準(zhǔn)、A對(duì)照、A測(cè)定 )。

計(jì)算：

LDH活性單位的定義：以100ml血清，在37℃孵育15min， LDH催化底物產(chǎn)生1μmol丙酮酸為一個(gè)金氏酶活力單位。根據(jù)酶活性定義，計(jì)算出樣品中的LDH活性。

以LDH活力(金氏)單位(U)為橫坐標(biāo)，以(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白 )吸光度之差值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，用(A測(cè)定-A對(duì)照 )吸光度之差值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出待測(cè)樣品的LDH酶活力單位。

其中：A標(biāo)準(zhǔn)=標(biāo)準(zhǔn)孔的吸光度

A空白=空白孔的吸光度

A測(cè)定=測(cè)定孔的吸光度

A對(duì)照=對(duì)照孔的吸光度

注意事項(xiàng):

1. 血清或肝素抗凝血漿檢測(cè)效果較好，草酸鹽、EDTA抗凝劑對(duì)LDH活性有抑制作用。

2. 避免使用溶血樣本。處理后的樣品應(yīng)及時(shí)檢測(cè)，否則易失效。

3. LD4和LD5對(duì)冷不穩(wěn)定，提取出來(lái)的血清樣本，不宜冰箱放置，室溫放置2~3天有效。

4. 比色應(yīng)在3~15min內(nèi)完成，否則吸光度會(huì)下降。

5. 酶促反應(yīng)中，組織勻漿液取樣量為5~30ul，應(yīng)相應(yīng)增加空白和標(biāo)準(zhǔn)中蒸餾水的用量。

6. 如果樣品中酶活性過(guò)高，可減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再行測(cè)定。

7. 堿性顯色液有一定腐蝕性，請(qǐng)小心操作。

8. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期： 6個(gè)月有效。