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ACK紅細(xì)胞裂解液(ACK Lysis Buffer) 使用說明書

時(shí)間:2022/8/8閱讀:434
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ACK紅細(xì)胞裂解液(ACK Lysis Buffer)

產(chǎn)品貨號(hào)T10105

產(chǎn)品規(guī)格100ml/500ml

 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

在生物科研領(lǐng)域,經(jīng)常需要去除紅細(xì)胞,去除紅細(xì)胞的方法有多種,如ACK Lysis BufferTris-氯化銨紅細(xì)胞裂解液、Gey's Lysis Buffer。ACK 紅細(xì)胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer)也稱 ACK Lysis Buffer,是一種從人、鼠或其他哺乳動(dòng)物等體內(nèi)的組織樣品或血液中裂解并去除無核紅細(xì)胞的溶液,其主要有效成分為 NH4Cl。

尚寶生物 ACK Lysis Buffer 經(jīng)過優(yōu)化配方,在裂解無核紅細(xì)胞的同時(shí)幾乎不損傷淋巴細(xì)胞(Lymphocyte)或其它有細(xì)胞核的細(xì)胞。對(duì)于裂解、去除有細(xì)胞核紅細(xì)胞,例如鳥或禽類的紅細(xì)胞,效果不佳,裂解類似細(xì)胞時(shí),不建議采用。本裂解液經(jīng)過濾除菌,經(jīng)過 ACK Lysis Buffer 處理過的血液或組織細(xì)胞樣品可以用于后續(xù)的細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測(cè)。

 

產(chǎn)品組成

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

保存條件

ACK Lysis Buffer

100ml/500ml

4

 

自備材料:

1. 胰dan bai酶

2. 離心機(jī)

3. PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液

 

操作步驟(僅供參考)

()組織細(xì)胞樣本的常規(guī)操作

1. 制備細(xì)胞懸液: 新鮮組織經(jīng)過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理,通過適當(dāng)方法制備成細(xì)胞懸液,離心棄上清。

2. 裂解: 加入35倍細(xì)胞沉淀體積的ACK Lysis Buffer,輕柔吹打混勻,裂解12min。

本操作步驟在4℃條件下操作更佳,亦可在室溫下操作。

3. 離心: 4℃,400500g離心5min,棄紅色上清。如無低溫離心機(jī),本步驟亦可在室溫下操作。

4. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*,可以重復(fù)上述步驟2和步驟3各一次。

5. 洗滌:根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求加入適量PBSHBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,輕柔混勻重懸沉淀。4℃,400500g 離心23min,棄上清,該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液的量一般應(yīng)大于細(xì)胞沉淀體積的5倍以上。

6. 如有必要,重復(fù)上述步驟5一次,共洗滌12次。

7. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀,進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

()組織細(xì)胞樣本的快速操作(無需洗滌)

1. 制備細(xì)胞懸液:新鮮組織經(jīng)過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理,通過適當(dāng)方法制備成細(xì)胞懸液,離心棄上清。

2. 裂解:加入細(xì)胞5倍細(xì)胞沉淀體積的ACK Lysis Buffer,輕柔吹打混勻,裂解12min。

本操作步驟在 4℃條件下操作更佳,亦可在室溫下操作。

3. 加入1520ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,輕柔混勻。

4. 離心:4℃400500g離心5min,棄紅色上清,本離心步驟亦可在室溫下操作。

5. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*,可以重復(fù)上述步驟24各一次。

6. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀,進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

()血液樣本的常規(guī)操作

1. 取新鮮抗凝血,400500g離心5min,棄上清。

2. 裂解: 加入610倍細(xì)胞沉淀體積的ACK Lysis Buffer,輕柔吹打混勻,裂解15min。

本操作步驟在4℃條件下操作更佳,亦可在室溫下操作。(特別提醒:對(duì)于鼠的血液,裂解12min已經(jīng)足夠,對(duì)于人的外周血,宜延長裂解時(shí)間至45min,并且裂解過程中輕輕搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。)

3. 離心: 4℃,400500g離心5min,棄紅色上清。如無低溫離心機(jī),本步驟亦可在室溫下操作。

4. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*,可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。

5. 洗滌: 根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,輕柔混勻重懸沉淀。4℃400500g離心23min,棄上清,該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBSHBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液的量一般應(yīng)大于細(xì)胞沉淀體積的5倍以上。

6. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀,進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

注意: 對(duì)于微量或少量的血液樣本,可以不用第1步操作,可直接加入10倍血液體積的ACK Lysis Buffer進(jìn)行第2步操作,并在4℃或室溫裂解415min。對(duì)于鼠的血液,裂解45min已經(jīng)足夠; 對(duì)于人的外周血,宜延長裂解時(shí)間至10min,但通常不宜超過15min,并且裂解過程中宜適當(dāng)搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。

()血液樣本的快速操作(無需洗滌)

1. 新鮮抗凝血中加入10倍體積的ACK Lysis Buffer,輕輕吹打混勻,裂解415min。本操作步驟在4℃條件下操作更佳,亦可在室溫下操作。(特別提醒:對(duì)于鼠的血液,裂解45min 已經(jīng)足夠,對(duì)于人的外周血,宜延長裂解時(shí)間至10min,但通常不宜超過15min,并且裂解過程中宜適當(dāng)搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。)

2. 加入 2030ml PBSHBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,輕柔混勻。

3. 400500g離心5min,棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

4. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*,可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。

5. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀,進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

 

注意事項(xiàng):

1. 制備細(xì)胞懸液時(shí)應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要,不一定要制備成單細(xì)胞懸液。

2. 后續(xù)試驗(yàn)如果是用于細(xì)胞培養(yǎng),操作過程中應(yīng)注意無菌操作,盡量在超凈工作臺(tái)內(nèi)操作。

3. 離心步驟盡量在4℃離心機(jī)上操作。

4. 常規(guī)步驟不快速步驟的區(qū)別在于:常規(guī)步驟多了一步洗滌過程的離心,可以節(jié)省洗滌液的用量,并且洗滌效果也更好,不需要大體積的離心管;快速步驟少了一次離心過程,洗滌效果略差一些,同時(shí)需要大體積的離心管。

5. 離心洗滌后,通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)影響后續(xù)的檢測(cè)。

6. 如果經(jīng)過ACK Lysis Buffer處理后的樣品后續(xù)用于總RNA的提取,在處理細(xì)胞時(shí)不必使用DEPC處理的溶液,即無需在該操作中特意去除 RNase。

7. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

 

有效期6個(gè)月有效。

 


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