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BCA微量蛋白定量試劑盒
產(chǎn)品貨號:34021
產(chǎn)品規(guī)格:1000次
產(chǎn)品簡介:
BCA蛋白定量法是目前廣泛使用的蛋白定量方法之一。本產(chǎn)品是基于BCA(Bicinchoninic Acid)法研制而成,實現(xiàn)了對蛋白質(zhì)進行快速、穩(wěn)定、靈敏的濃度測定。其原理是在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì) 分子中的肽鏈結(jié)構(gòu)能與Cu2+絡合生成絡合物,同時將Cu2+還原成Cu+。BCA試劑可敏感特異地與Cu+結(jié)合,形成穩(wěn)定的有顏色的復合物。在562 nm處有高的光吸收值,顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比,可根據(jù)吸收值的大小來測定蛋白質(zhì)的含量。
本試劑盒專為低蛋白濃度樣品的蛋白定量而設計,可精確測定濃度為0.2-100μg/ml的蛋白溶液,試劑盒的靈敏性高,平行性好,不同種蛋白之間的測量差異極低。每個試劑盒可以檢測1000個樣品。
包裝清單:
操作步驟:
1.蛋白標準品的準備
取適量5mg/ml蛋白標準,用PBS稀釋至終濃度為100μg/ml。例如取10μl 5mg/ml蛋白標準,加入490μl PBS即可配制成100μg/ml蛋白標準。蛋白樣品在什么溶液中,標準品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡便起見,也可以用0.9% NaCl或PBS稀釋標準品。稀釋后的蛋白標準需-20oC長期保存。
2. 工作液配制
根據(jù)樣品數(shù)量,按1體積試劑C加25體積試劑B,混勻后加26體積試劑A,再次混勻(按照C-B-A的順序加,切勿更改加樣順序)。配制適量BCA工作液,充分混勻。
3. 蛋白濃度測定
a. 將標準品按0、5、10、20、40、60、80、100μl加到96孔板的標準品孔中,加標準品稀 釋液補足到100μl,相當于標準品濃度分別為0、5、10、20、40、60、80、100μg/ml。標準品濃度可根據(jù)實際實驗需求更改。
b. 加適當體積樣品到96孔板的樣品孔中。如果樣品不足100μl,需加標準品稀釋液補足到 100μl。請注意記錄樣品體積。
c. 各孔加入100μl工作液,60oC放置60分鐘。
d. 用酶標儀測定A562,或540-595nm之間的其他波長的吸光度。
e. 根據(jù)標準品濃度和A562值做出標準曲線,根據(jù)標準曲線和使用的樣品體積計算出樣品的蛋白濃度。
常見問題:
1. 測定標準曲線時發(fā)現(xiàn)隨著標準品濃度的增加吸光度或顏色沒有明顯變化。
可能的原因是樣品中含有嚴重干擾BCA法測定蛋白濃度的物質(zhì)。
2. 是否每次測定時都需要做標準曲線?
建議每次測定時都做標準曲線。因為BCA法測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深,并且顯色反應的速度和溫度有關(guān),所以除非精確控制顯色反應的時間和溫度,否則如需精確測定宜每次都做標準曲線。
注意事項:
需酶標儀一臺,測定波長為540-595nm之間,562nm最佳。需96孔板。如果沒有酶標儀,也可以使用普通的分光光度計測定,但測定時,需根據(jù)比色皿的最小檢測體積,適當加大BCA工作液的用量使不小于最小檢測體積,樣品和標準品的用量可相應按比例放大也可不變。使用分光光度計測定蛋白濃度時,每個試劑盒可以測定的樣品數(shù)量可能會顯著減少。?
如發(fā)現(xiàn)樣品稀釋液或裂解液本身就有較高背景,請試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。
EDTA濃度必須小于10mM,不兼容EGTA。不適用BCA法時,請試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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