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BCA微量蛋白定量試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào):34021
產(chǎn)品規(guī)格:1000次
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
BCA蛋白定量法是目前廣泛使用的蛋白定量方法之一。本產(chǎn)品是基于BCA(Bicinchoninic Acid)法研制而成,實(shí)現(xiàn)了對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行快速、穩(wěn)定、靈敏的濃度測(cè)定。其原理是在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì) 分子中的肽鏈結(jié)構(gòu)能與Cu2+絡(luò)合生成絡(luò)合物,同時(shí)將Cu2+還原成Cu+。BCA試劑可敏感特異地與Cu+結(jié)合,形成穩(wěn)定的有顏色的復(fù)合物。在562 nm處有高的光吸收值,顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比,可根據(jù)吸收值的大小來(lái)測(cè)定蛋白質(zhì)的含量。
本試劑盒專(zhuān)為低蛋白濃度樣品的蛋白定量而設(shè)計(jì),可精確測(cè)定濃度為0.2-100μg/ml的蛋白溶液,試劑盒的靈敏性高,平行性好,不同種蛋白之間的測(cè)量差異極低。每個(gè)試劑盒可以檢測(cè)1000個(gè)樣品。
包裝清單:
操作步驟:
1.蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備
取適量5mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn),用PBS稀釋至終濃度為100μg/ml。例如取10μl 5mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn),加入490μl PBS即可配制成100μg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)。蛋白樣品在什么溶液中,標(biāo)準(zhǔn)品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡(jiǎn)便起見(jiàn),也可以用0.9% NaCl或PBS稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋后的蛋白標(biāo)準(zhǔn)需-20oC長(zhǎng)期保存。
2. 工作液配制
根據(jù)樣品數(shù)量,按1體積試劑C加25體積試劑B,混勻后加26體積試劑A,再次混勻(按照C-B-A的順序加,切勿更改加樣順序)。配制適量BCA工作液,充分混勻。
3. 蛋白濃度測(cè)定
a. 將標(biāo)準(zhǔn)品按0、5、10、20、40、60、80、100μl加到96孔板的標(biāo)準(zhǔn)品孔中,加標(biāo)準(zhǔn)品稀 釋液補(bǔ)足到100μl,相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)品濃度分別為0、5、10、20、40、60、80、100μg/ml。標(biāo)準(zhǔn)品濃度可根據(jù)實(shí)際實(shí)驗(yàn)需求更改。
b. 加適當(dāng)體積樣品到96孔板的樣品孔中。如果樣品不足100μl,需加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)足到 100μl。請(qǐng)注意記錄樣品體積。
c. 各孔加入100μl工作液,60oC放置60分鐘。
d. 用酶標(biāo)儀測(cè)定A562,或540-595nm之間的其他波長(zhǎng)的吸光度。
e. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度和A562值做出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)和使用的樣品體積計(jì)算出樣品的蛋白濃度。
常見(jiàn)問(wèn)題:
1. 測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)隨著標(biāo)準(zhǔn)品濃度的增加吸光度或顏色沒(méi)有明顯變化。
可能的原因是樣品中含有嚴(yán)重干擾BCA法測(cè)定蛋白濃度的物質(zhì)。
2. 是否每次測(cè)定時(shí)都需要做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)?
建議每次測(cè)定時(shí)都做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。因?yàn)?/span>BCA法測(cè)定時(shí)顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深,并且顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān),所以除非精確控制顯色反應(yīng)的時(shí)間和溫度,否則如需精確測(cè)定宜每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
注意事項(xiàng):
需酶標(biāo)儀一臺(tái),測(cè)定波長(zhǎng)為540-595nm之間,562nm最佳。需96孔板。如果沒(méi)有酶標(biāo)儀,也可以使用普通的分光光度計(jì)測(cè)定,但測(cè)定時(shí),需根據(jù)比色皿的最小檢測(cè)體積,適當(dāng)加大BCA工作液的用量使不小于最小檢測(cè)體積,樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的用量可相應(yīng)按比例放大也可不變。使用分光光度計(jì)測(cè)定蛋白濃度時(shí),每個(gè)試劑盒可以測(cè)定的樣品數(shù)量可能會(huì)顯著減少。?
如發(fā)現(xiàn)樣品稀釋液或裂解液本身就有較高背景,請(qǐng)?jiān)囉?/span>Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒。
EDTA濃度必須小于10mM,不兼容EGTA。不適用BCA法時(shí),請(qǐng)?jiān)囉?/span>Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒。
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