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DAB辣根過氧化物酶顯色試劑盒
產(chǎn)品貨號: T15132
產(chǎn)品規(guī)格:2×50ml
產(chǎn)品簡介:
DAB 辣根過氧化物酶顯色液(DAB Horseradish Peroxidase Color Development Kit) 是一種依據(jù)辣根過氧化物酶(HRP)結(jié)合顯色,用于免疫組化顯色、原位雜交顯色或Western、Southern、Northern、EMSA等膜顯色的試劑盒。
DAB 即 3,3N-Diaminobenzidine Tertrahydrochloride, 是辣根過氧化物酶的常用底物。在辣根過氧化物酶的催化下, DAB 會產(chǎn)生棕色沉淀。該棕色沉淀不溶于水和乙醇。因此在DAB顯色后, 還可以使用溶于乙醇的染料進(jìn)行后續(xù)染色。
本顯色液可以用于細(xì)胞或組織在免疫組化或原位雜交時(shí)結(jié)合的辣根過氧化物酶顯色,也可用于Western等結(jié)合有辣根過氧化物酶的膜的顯色檢測。同時(shí)也可以用于細(xì)胞或組織內(nèi)源性的辣根過氧化物酶顯色。
產(chǎn)品組成:
名稱 | 2×50ml | 保存條件 |
試劑(A): DAB 顯色液 A | 50ml | -20℃,避光 |
試劑(B): DAB 顯色液 B | 50ml | -20℃,避光 |
試劑(C): DAB 顯色液 C | 100μl | 室溫 |
自備材料:
1. 洗滌液
2. 蒸餾水
操作步驟(僅供參考):
1. 常規(guī)組織切片、細(xì)胞樣品、膜與辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗體或其它形式的探針孵育后,用適當(dāng)洗滌液洗滌3~5次,每次3~5min。對于檢測內(nèi)源性辣根過氧化物酶的組織或細(xì)胞樣品,在適當(dāng)固定后,也可用洗滌液洗滌3~5 次,每次3~5min。
2. 按(A):試劑(B):試劑(C)=5000:5000:3 的比例混合, 即為DAB染色工作液,即配即用。
3. 洗滌過組織后,去除洗滌液,加入適量DAB染色工作液,確保覆蓋樣品。
4. 室溫避光孵育30min或更長時(shí)間,直至顯色至預(yù)期深淺。
5. 去除DAB染色工作液,用蒸餾水清洗1~2次即可終止顯色反應(yīng)。
6. 對組織切片或細(xì)胞樣品,反應(yīng)終止后,如有必要可用中性紅染色液染色,便于觀察。對于膜染色,反終止后可室溫晾干避光保存。
注意事項(xiàng):
1. DAB是致癌物,請注意適當(dāng)防護(hù)。
2. 試劑(A)、試劑(B)避免反復(fù)凍融。
3. 為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
常見問題及可能原因:
1. 背景顯色太深
① 在免疫組化時(shí)如果背景顯色太深,考慮使用適當(dāng)?shù)姆忾]液進(jìn)行封閉,例如選購適當(dāng)?shù)姆忾]液或使用和一抗相同來源的血清(10%)進(jìn)行封閉。也應(yīng)請注意選購經(jīng)過適當(dāng)吸附的二抗,以減小二抗的非特異性吸附。
② 在進(jìn)行含內(nèi)源性過氧化氫酶的免疫組化時(shí),如果背景顯色太深,需注意滅活內(nèi)源性過氧化氫酶??梢栽?/span>4體積甲醇中加入1體積3%過氧化氫,混勻后用于內(nèi)源性過氧化氫酶的滅活。
③ 可以考慮縮短顯色時(shí)間,或降低二抗?jié)舛取?
④ 選擇適當(dāng)強(qiáng)度的洗滌液,或延長洗滌時(shí)間。
2. 沒有顯色或顯色太弱
①當(dāng)提高一抗或二抗的濃度。檢測二抗效果,滴一滴稀釋二抗在膜上,檢測二抗是否可以被正常顯色。
②考慮使用更加靈敏的放大檢測體系,例如使用生物&素檢測體系。
③適當(dāng)延長顯色時(shí)間,另外確定抗原修復(fù)是否對于使用的一抗是必需的。
有效期:12個月有效。
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