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DAB辣根過(guò)氧化物酶顯色試劑盒使用說(shuō)明書

時(shí)間:2022/4/28閱讀:275
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DAB辣根過(guò)氧化物酶顯色試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào): T15132

產(chǎn)品規(guī)格:2×50ml

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

DAB 辣根過(guò)氧化物酶顯色液(DAB Horseradish Peroxidase Color Development Kit) 是一種依據(jù)辣根過(guò)氧化物酶(HRP)結(jié)合顯色,用于免疫組化顯色、原位雜交顯色或Western、Southern、NorthernEMSA等膜顯色的試劑盒。

DAB 3,3N-Diaminobenzidine Tertrahydrochloride, 是辣根過(guò)氧化物酶的常用底物。在辣根過(guò)氧化物酶的催化下, DAB 會(huì)產(chǎn)生棕色沉淀。該棕色沉淀不溶于水和乙醇。因此在DAB顯色后, 還可以使用溶于乙醇的染料進(jìn)行后續(xù)染色。

本顯色液可以用于細(xì)胞或組織在免疫組化或原位雜交時(shí)結(jié)合的辣根過(guò)氧化物酶顯色,也可用于Western等結(jié)合有辣根過(guò)氧化物酶的膜的顯色檢測(cè)。同時(shí)也可以用于細(xì)胞或組織內(nèi)源性的辣根過(guò)氧化物酶顯色。

產(chǎn)品組成:

名稱

2×50ml

保存條件

試劑(A): DAB 顯色液 A

50ml

-20℃,避光

試劑(B): DAB 顯色液 B

50ml

-20℃,避光

試劑(C): DAB 顯色液 C

100μl

室溫

自備材料:

1. 洗滌液

2. 蒸餾水

操作步驟(僅供參考)

1. 常規(guī)組織切片、細(xì)胞樣品、膜與辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗體或其它形式的探針?lè)跤?,用適當(dāng)洗滌液洗滌35次,每次35min。對(duì)于檢測(cè)內(nèi)源性辣根過(guò)氧化物酶的組織或細(xì)胞樣品,在適當(dāng)固定后,也可用洗滌液洗滌35 次,每次35min。

2. (A):試劑(B):試劑(C)=5000:5000:3 的比例混合, 即為DAB染色工作液,即配即用。

3. 洗滌過(guò)組織后,去除洗滌液,加入適量DAB染色工作液,確保覆蓋樣品。

4. 室溫避光孵育30min或更長(zhǎng)時(shí)間,直至顯色至預(yù)期深淺。

5. 去除DAB染色工作液,用蒸餾水清洗12次即可終止顯色反應(yīng)。

6. 對(duì)組織切片或細(xì)胞樣品,反應(yīng)終止后,如有必要可用中性紅染色液染色,便于觀察。對(duì)于膜染色,反終止后可室溫晾干避光保存。

注意事項(xiàng):

1. DAB是致癌物,請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。

2. 試劑(A)、試劑(B)避免反復(fù)凍融。

3. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

常見(jiàn)問(wèn)題及可能原因:

1. 背景顯色太深

在免疫組化時(shí)如果背景顯色太深,考慮使用適當(dāng)?shù)姆忾]液進(jìn)行封閉,例如選購(gòu)適當(dāng)?shù)姆忾]液或使用和一抗相同來(lái)源的血清(10%)進(jìn)行封閉。也應(yīng)請(qǐng)注意選購(gòu)經(jīng)過(guò)適當(dāng)吸附的二抗,以減小二抗的非特異性吸附。

在進(jìn)行含內(nèi)源性過(guò)氧化氫酶的免疫組化時(shí),如果背景顯色太深,需注意滅活內(nèi)源性過(guò)氧化氫酶??梢栽?/span>4體積甲醇中加入1體積3%過(guò)氧化氫,混勻后用于內(nèi)源性過(guò)氧化氫酶的滅活。

可以考慮縮短顯色時(shí)間,或降低二抗?jié)舛取?

選擇適當(dāng)強(qiáng)度的洗滌液,或延長(zhǎng)洗滌時(shí)間。

2. 沒(méi)有顯色或顯色太弱

當(dāng)提高一抗或二抗的濃度。檢測(cè)二抗效果,滴一滴稀釋二抗在膜上,檢測(cè)二抗是否可以被正常顯色。

考慮使用更加靈敏的放大檢測(cè)體系,例如使用生物&素檢測(cè)體系。

適當(dāng)延長(zhǎng)顯色時(shí)間,另外確定抗原修復(fù)是否對(duì)于使用的一抗是必需的。

效期:12個(gè)月有效。



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