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組織無機(jī)磷含量檢測試劑盒(可見分光光度法)
正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。
產(chǎn)品貨號(hào):BA1481
產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣
產(chǎn)品內(nèi)容:
試劑一:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體10mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前配制,加入20 mL蒸餾水,充分溶解后加入試劑二(全部),混勻。
標(biāo)準(zhǔn)品:液體1mL×1支,1mmol/L無機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)液,4℃保存。
產(chǎn)品說明:
無機(jī)磷主要指磷酸根,參與生物體內(nèi)多種代謝,包括能量代謝、核酸代謝、蛋白質(zhì)磷酸化和脫磷酸化等等,此外促進(jìn)碳水化合物的合成、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)運(yùn)。
鉬藍(lán)與磷酸根生成660nm有特征吸收峰的物質(zhì),通過測定660nm光吸收,即可計(jì)算無機(jī)磷含量。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL玻璃比色皿和蒸餾水。
操作步驟:
一、無機(jī)磷提?。?/span>
稱取約0.1g組織,加試劑一1.0 mL冰上充分勻漿,4℃,10000rpm,離心10min,取上清液,置冰上待測。
二、測定:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長到660nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 打開水浴鍋,調(diào)節(jié)溫度到40℃。
2. 測定:
試劑名稱(uL) | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 測定管 |
標(biāo)準(zhǔn)液 | 50 | ||
上清液 | 50 | ||
蒸餾水 | 500 | 450 | 450 |
試劑三 | 500 | 500 | 500 |
分別混勻后置于40℃水浴保溫10min,室溫冷卻10min后于660nm測定吸光度,分別記為A空白管、A標(biāo)準(zhǔn)管、A測定管。
注意:需在40min內(nèi)完成比色,空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。
三、組織無機(jī)磷含量計(jì)算:
無機(jī)磷含量(mmol/g 樣本鮮重)= [C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)]×V總÷W
=0.001×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷W
C標(biāo)準(zhǔn)液:1mmol/L;V總:上清液總體積,1mL=0.001 L;W:樣品質(zhì)量,g。
注意事項(xiàng):
1、試劑三需臨用前配制,限當(dāng)天使用。
2、測定前先用1~2個(gè)樣品做預(yù)實(shí)驗(yàn),如吸光值大于0.8,需用蒸餾水做相應(yīng)稀釋。
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