細(xì)菌基因組提取試劑盒用于細(xì)菌基因組DNA的少量提取,純化原理是利用細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞,釋放基因組DNA。基因組DNA被硅膠膜柱可逆吸附。通過(guò)蛋白酶消化和沖洗液去除蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和其他雜質(zhì)后,用純化溶液洗脫獲得基因組DNA。本品可在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期(不超過(guò)106-108)μG超純基因組DNA(od260/280=1.7-1.9)從0.5-2ml菌液中提取3-20%,可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)如酶切和PCR。
1、高效率:一次3-20μG基因組DNA。
2、快速:可在30分鐘內(nèi)獲得超純基因組DNA。
3、安全性:整個(gè)操作過(guò)程中不使用苯酚/氯仿有機(jī)物。
4、純度高:無(wú)需進(jìn)一步純化,可直接用于下游實(shí)驗(yàn)。
細(xì)菌基因組提取試劑盒采用可特異性結(jié)合DNA的離心吸附柱和*的緩沖系統(tǒng)提取細(xì)菌基因組DNA。離心吸附柱所用的硅基質(zhì)材料是新型材料,能高效、特異地吸附DNA,去除細(xì)胞內(nèi)的雜質(zhì)蛋白質(zhì)等有機(jī)物。提取的基因組純度高,質(zhì)量穩(wěn)定可靠。本試劑盒提取的基因組DNA可用于各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR、文庫(kù)構(gòu)建、雜交等實(shí)驗(yàn)。
細(xì)菌基因組提取試劑盒使用注意事項(xiàng):
1、避免重復(fù)凍融樣本,否則提取的片段會(huì)變小,提取量會(huì)減少。
2、試劑盒內(nèi)溶液若有沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后使用,不影響提取效果。
3、如果實(shí)驗(yàn)中離心步驟中柱子堵塞,可以適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間。
4、洗脫緩沖液體積不小于50ul,體積過(guò)小會(huì)影響回收效率;洗脫液的pH值也會(huì)影響洗脫效率。如果需要水作為洗脫液,確保其pH值在8.0左右(水的pH值可用NaOH調(diào)節(jié)至此范圍)。如果pH值低于7.0,洗脫效率會(huì)降低。DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,以防止DNA降解。
5、DNA濃度和純度的檢測(cè):獲得的基因組片段大小與樣品保存時(shí)間、操作過(guò)程中的剪切力等因素有關(guān)。回收的片段可以通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè),以確定濃度和純度。DNA應(yīng)在od260處有一個(gè)明顯的吸收峰,od260值為1.0,相當(dāng)于約50μG/ml雙鏈DNA、40μG/ml單鏈DNA。od260/0d280比率應(yīng)為1.7-1.9。如果不使用洗脫緩沖液進(jìn)行洗脫,而是使用去離子水,比例會(huì)低,因?yàn)閜H值和離子的存在會(huì)影響光吸收值,但并不代表純度低。