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BCA蛋白濃度測定試劑盒

時間:2022/2/9閱讀:540
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BCA蛋白濃度測定試劑盒

產品貨號:34001

 

產品規(guī)格:100/250/500

 

產品簡介:

BCA蛋白濃度測定試劑盒(BCA Protein Assay Kit)是根據目前世界上常用的兩種蛋白濃度檢測方法之一BCA法研制而成,實現了蛋白濃度測定的簡單、高穩(wěn)定性、高靈敏度和高兼容性。靈敏度高,檢測濃度下限達到25μg/ml,最小檢測蛋白量達到0.5μg,待測樣品體積為1-20μl。在50-2000μg/ml濃度范圍內有較好的線性關系。

    BCA法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質的影響,可以兼容樣品中高達5%SDS,5%Triton X-100,5%Tween20、60、80。但本試劑盒受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響,需確保EDTA低于10mM,無EGTA,二硫蘇糖醇(DTT)低于1mMβ-巰基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于0.01%。不適用BCA法時建議試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。

 

包裝清單:

產品名稱

100次包裝

250次包裝

500次包裝

儲存條件

BCA試劑 A

20ml

50ml

100ml

室溫

BCA試劑 B

0.4 ml

1ml

2ml

室溫

蛋白標準(BSA) 5mg/ml

0.4 ml

1ml

2ml

-20℃

 

操作步驟:

1. 蛋白標準品的準備

取適量5mg/ml蛋白標準,用PBS稀釋至終濃度為0.5mg/ml。例如取50μl 5mg/ml蛋白標準,加入450μl PBS即可配制成0.5mg/ml蛋白標準。蛋白樣品在什么溶液中,標準品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡便起見,也可以用0.9% NaClPBS稀釋標準品。稀釋后的0.5mg/ml蛋白標準需-20oC長期保存。

2. BCA工作液配制

根據樣品數量,按50體積BCA試劑A1體積BCA試劑B(50:1)配制適量BCA工作液,充分混勻。例如5ml BCA試劑A100μlBCA試劑B,混勻,配制成5.1ml BCA工作液。BCA工作液室溫24小時內穩(wěn)定。

3. 蛋白濃度測定

a. 將標準品按0、1、2、4、8、1216、20μl加到96孔板的標準品孔中,加標準品稀釋液補足到20μl,相當于標準品濃度分別為0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/ml。

b. 加適當體積樣品到96孔板的樣品孔中。如果樣品不足20μl,需加標準品稀釋液補足到20μl。請注意記錄樣品體積。

c. 各孔加入200μl BCA工作液,37oC放置20-30分鐘。

: 也可以室溫放置2小時,或60oC放置30分鐘。BCA法測定蛋白濃度時,顏色會隨著時間的延長不斷加深。并且顯色反應會因溫度升高而加快。如果濃度較低,適合在較高溫度孵育,或適當延長孵育時間。

d. 用酶標儀測定A562,或540-595nm之間的其他波長的吸光度。

e. 根據標準曲線和使用的樣品體積計算出樣品的蛋白濃度。

 

 

常見問題:

1. 測定標準曲線時發(fā)現隨著標準品濃度的增加吸光度或顏色沒有明顯變化。

可能的原因是樣品中含有嚴重干擾BCA法測定蛋白濃度的物質。

2. 是否每次測定時都需要做標準曲線?

建議每次測定時都做標準曲線。因為BCA法測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深,并且顯色反應的速度和溫度有關,所以除非精確控制顯色反應的時間和溫度,否則如需精確測定宜每次都做標準曲線。

 

注意事項:

1. 需酶標儀一臺,測定波長為540-595nm之間,562nm最佳。需96孔板。如果沒有酶標儀,也可以使用普通的分光光度計測定,但測定時,需根據比色皿的最小檢測體積,適當加大BCA工作液的用量使不小于最小檢測體積,樣品和標準品的用量可相應按比例放大也可不變。使用分光光度計測定蛋白濃度時,每個試劑盒可以測定的樣品數量可能會顯著減少。?

2. 如發(fā)現樣品稀釋液或裂解液本身就有較高背景,請試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。

3. EDTA濃度必須小于10mM,不兼容EGTA。不適用BCA法時,請試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。

4. 本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。

5. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 


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