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ATPase染色液(鈣鈷法)

時間:2022/1/25閱讀:583
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ATPase染色液(鈣鈷法)

產(chǎn)品貨號:R23245

產(chǎn)品規(guī)格:5×50ml

產(chǎn)品簡介:

三磷酸腺苷酶( adenosine triphosphataseATPase)是一種水解酶,是催化ATP合成的一種酶。三磷酸腺苷酶根據(jù)所用激活劑、抑制劑以及酶定位的不同分為膜性三磷酸腺苷酶、肌球蛋白三磷酸腺苷酶、線粒體三磷酸腺苷酶等。ATPase 能水解三磷酸腺苷為磷酸腺苷和磷酸,此酶只作用于磷酸與磷酸之間的高能鍵,因而釋放大量能量。其催化反應(yīng)如下:

A-P-P-P + H O→A-P-P + H3PO4 +能量

尚寶生物 ATPase染色(鈣鈷法)原理在于三磷酸腺苷酶水解三磷酸腺苷為二磷腺苷和磷酸,磷酸根與鈣離子結(jié)合為磷酸鈣沉淀,再依次被置換為磷酸鈷和硫化鈷,最終產(chǎn)物為黑色硫化鈷沉淀。

 

產(chǎn)品組成:

產(chǎn)品名稱

5×50ml

保存條件

試劑(A): 鈣鹽溶液

50ml

室溫,避光

試劑(B): ATPase孵育液

50ml

4,避光

試劑(C): 硝酸鈷溶液

50ml

室溫

試劑(D): 中性福爾馬林

50ml

室溫

試劑(E): ALP硫化溶液

2×1ml

室溫,避光

試劑(F): ATPase對照液

10ml

4,避光

 

自備材料:

1. 蒸餾水

2. 恒溫箱

 

操作步驟(僅供參考)

(一)石蠟切片染色

1. 石蠟切片脫蠟后,入蒸餾水。

2. 入鈣鹽溶液中,37℃溫箱5min。

3. ATPase孵育液,孵育24h。蒸餾水洗1min。

4. 入硝酸鈷溶液5min,入蒸餾水。

5. 入中性福爾馬林室溫固定2min。流水沖洗2min。

6. 在上述過程中配制ALP硫化工作液,即取試劑(E)用蒸餾水稀釋50, 即為ALP硫化

7. 工作液,即配即用。切片入硫化工作液,孵育 2min

8. 流水洗10min后,入蒸餾水。

9. 石蠟切片經(jīng)95%乙醇溶液及無水乙醇脫水。二甲苯透明,樹膠封片。

(二)冰凍切片染色

1. 冰凍切片直接入蒸餾水。

2. 入鈣鹽溶液中,37℃溫箱5min。

3. ATPase孵育液,孵育40min。蒸餾水洗1min。

4. 入硝酸鈷溶液5min,入蒸餾水。

5. 入中性福爾馬林,室溫固定2min。流水沖洗2min。

6. 在上述過程中配制ALP硫化工作液,即取試劑(E)用蒸餾水稀釋50, 即為ALP硫化工作液,即配即用。切片入硫化工作液,孵育2min。

7. 流水洗10min后,入蒸餾水。甘油明膠封固。

 

染色結(jié)果:

酶所在陽性部位      黑色硫化鈷沉淀

 

陰性對照 (可選)

1. 取對照切片,用試劑(F)- ATPase對照液 進(jìn)行孵育,并不用ATPase孵育液 孵育的切片進(jìn)行比較。兩者反應(yīng)相同部位可能有非特異性磷酸(單酯)酶存在,兩者不同部位才是ATP酶活性所在。

2. 將切片入80℃蒸餾水10min,再不其他組織切片同時孵育,結(jié)果應(yīng)為陰性。

 

注意事項:

1. ALP孵育液、ALP硫化液易失效,最好分成小分儲存,一經(jīng)開啟立即使用。

2. ALP硫化液具有腐蝕性和刺激性氣味,應(yīng)小心操作。

3. 對冰凍切片染色時,應(yīng)減少切片在室溫暴露的時間。

 

有效期:6個月有效。

 


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