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ATPase染色液(鈣鈷法)
產(chǎn)品貨號:R23245
產(chǎn)品規(guī)格:5×50ml
產(chǎn)品簡介:
三磷酸腺苷酶( adenosine triphosphatase,ATPase)是一種水解酶,是催化ATP合成的一種酶。三磷酸腺苷酶根據(jù)所用激活劑、抑制劑以及酶定位的不同分為膜性三磷酸腺苷酶、肌球蛋白三磷酸腺苷酶、線粒體三磷酸腺苷酶等。ATPase 能水解三磷酸腺苷為磷酸腺苷和磷酸,此酶只作用于磷酸與磷酸之間的高能鍵,因而釋放大量能量。其催化反應(yīng)如下:
A-P-P-P + H O→A-P-P + H3PO4 +能量
尚寶生物 ATPase染色(鈣鈷法)原理在于三磷酸腺苷酶水解三磷酸腺苷為二磷腺苷和磷酸,磷酸根與鈣離子結(jié)合為磷酸鈣沉淀,再依次被置換為磷酸鈷和硫化鈷,最終產(chǎn)物為黑色硫化鈷沉淀。
產(chǎn)品組成:
產(chǎn)品名稱 | 5×50ml | 保存條件 |
試劑(A): 鈣鹽溶液 | 50ml | 室溫,避光 |
試劑(B): ATPase孵育液 | 50ml | 4℃,避光 |
試劑(C): 硝酸鈷溶液 | 50ml | 室溫 |
試劑(D): 中性福爾馬林 | 50ml | 室溫 |
試劑(E): ALP硫化溶液 | 2×1ml | 室溫,避光 |
試劑(F): ATPase對照液 | 10ml | 4℃,避光 |
自備材料:
1. 蒸餾水
2. 恒溫箱
操作步驟(僅供參考):
(一)石蠟切片染色
1. 石蠟切片脫蠟后,入蒸餾水。
2. 入鈣鹽溶液中,37℃溫箱5min。
3. 入ATPase孵育液,孵育2~4h。蒸餾水洗1min。
4. 入硝酸鈷溶液5min,入蒸餾水。
5. 入中性福爾馬林,室溫固定2min。流水沖洗2min。
6. 在上述過程中配制ALP硫化工作液,即取試劑(E)用蒸餾水稀釋50倍, 即為ALP硫化
7. 工作液,即配即用。切片入硫化工作液,孵育 2min。
8. 流水洗10min后,入蒸餾水。
9. 石蠟切片經(jīng)95%乙醇溶液及無水乙醇脫水。二甲苯透明,樹膠封片。
(二)冰凍切片染色
1. 冰凍切片直接入蒸餾水。
2. 入鈣鹽溶液中,37℃溫箱5min。
3. 入ATPase孵育液,孵育40min。蒸餾水洗1min。
4. 入硝酸鈷溶液5min,入蒸餾水。
5. 入中性福爾馬林,室溫固定2min。流水沖洗2min。
6. 在上述過程中配制ALP硫化工作液,即取試劑(E)用蒸餾水稀釋50倍, 即為ALP硫化工作液,即配即用。切片入硫化工作液,孵育2min。
7. 流水洗10min后,入蒸餾水。甘油明膠封固。
染色結(jié)果:
酶所在陽性部位 黑色硫化鈷沉淀
陰性對照 (可選) :
1. 取對照切片,用試劑(F)- ATPase對照液 進(jìn)行孵育,并不用ATPase孵育液 孵育的切片進(jìn)行比較。兩者反應(yīng)相同部位可能有非特異性磷酸(單酯)酶存在,兩者不同部位才是ATP酶活性所在。
2. 將切片入80℃蒸餾水10min,再不其他組織切片同時孵育,結(jié)果應(yīng)為陰性。
注意事項:
1. ALP孵育液、ALP硫化液易失效,最好分成小分儲存,一經(jīng)開啟立即使用。
2. ALP硫化液具有腐蝕性和刺激性氣味,應(yīng)小心操作。
3. 對冰凍切片染色時,應(yīng)減少切片在室溫暴露的時間。
有效期:6個月有效。
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