Precellys研磨儀:助力水源細(xì)菌污染物的快速定量檢測
人類日常接觸到的水源,例如海洋、湖泊、河流等,可能已經(jīng)受到了微生物的污染。歐盟EU和美國環(huán)境保護(hù)機(jī)構(gòu)EPA都已經(jīng)將腸球菌Enterococcus spp與大腸桿菌E.coli的含量作為水質(zhì)檢測的指標(biāo)。本篇應(yīng)用中,法國Blue DNA Companion公司根據(jù)EU和EPA的條例,收集了水源之后,推出了一個總時間小于3小時,多參數(shù)檢測這兩種微生物的方法。這種快速定量檢測分析是基于RT-PCR這種針對活細(xì)菌的分析方法。其中在細(xì)菌裂解中,用到的是法國Bertin公司的高性能研磨器Precellys Evolution,該方法已經(jīng)被世界著名水務(wù)公司Suez Environment蘇伊士環(huán)境集團(tuán)認(rèn)證。 實驗材料
GenoSPYD過濾試劑盒(Blue DNA Compaion公司,法國);
Precellys Evolution組織研磨器(Bertin公司,法國);
MagSPYD自動化核酸提取平臺(Blue DNA Compaion公司,法國);
MIC PCR儀;
GenoSPYD針對Enterococcus spp與E.coli的q-PCR定量試劑盒。
實驗程序
1.微生物樣品收集:每個樣品被0.45μm的濾膜過濾。之后將濾膜裝到GenoSPYD裂解管中,并加入1.5mlGenoSPYD細(xì)菌裂解緩沖液;
2.將裂解管放入到Precellys Evolution組織研磨器中,研磨程序為轉(zhuǎn)速6500rpm、3個循環(huán)、每個循環(huán)研磨45s、循環(huán)間歇30s;
3.RNA提?。喊琑NA的溶菌產(chǎn)物使用GenoSPYD RNA提取試劑盒進(jìn)行純化,可在MagSPYD自動化核酸提取平臺進(jìn)行;
4.在MIC PCR儀上進(jìn)行qRT-PCR的檢測。
實驗結(jié)果
圖1為對Enterococcus spp檢測的qRT-PCR放大曲線結(jié)果, 表1為水中腸球菌Enterococcus spp與大腸桿菌E.coli的LOQ(定量檢測限)和LOD(檢測下限)的結(jié)果。
結(jié)論
GenoSPYD自動化產(chǎn)品解決方法配合Precellys組織研磨器可以在3小時內(nèi)快速檢測和定量活微生物樣本中一些特定如大腸桿菌、腸球菌、葡萄球菌、假單胞菌的RNA含量等。此方法的水質(zhì)檢測指標(biāo)可以達(dá)到100CFU,同時也被世界著名水務(wù)公司Suez Environment蘇伊士環(huán)境集團(tuán)認(rèn)證。
細(xì)菌樣本裂解程度直接決定了之后提取RNA的效率,Precellys Evolution研磨儀具備高性能、高效率、安全等特點,同時有冷卻裝置Cryolys Evolution,可使整個研磨過程的溫度準(zhǔn)確維持在0-10℃,加配無RNA酶的研磨kit,輕松實現(xiàn)穩(wěn)態(tài)RNA的提取,助力水源中細(xì)菌污染物的快速定量檢測,值得信賴!
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