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使用Coriolis MICRO空氣采樣器結(jié)合基于基因芯片技術(shù)的多重PCR檢測

——推動檢測多種氣傳真菌種類的超快速檢測系統(tǒng)的發(fā)展

氣傳真菌能夠引起一些生物腐蝕和健康問題。為了避免這些損害，在一些室內(nèi)環(huán)境例如工廠、博物館和其他一些公共場所檢測真菌菌落就顯得額外重要。然而目前常規(guī)的一些檢測真菌的方法需要一個培養(yǎng)的過程。

有研究報道Coriolis® µ有足夠收集能力，通過PCR擴增后，可以有效檢測單一真菌物種，而且不需要培養(yǎng)的過程。

本次應(yīng)用中，我們評估了一個超快速檢測系統(tǒng)，由基于基因芯片技術(shù)的多重PCR檢測系統(tǒng)GENOGATE和Coriolis® µ空氣采樣器組成，用來檢測氣傳真菌。

本次應(yīng)用的實驗材料包括：Coriolis® µ空氣采樣器，無菌錐形管，15ml收集液體（Bertin公司）；基于基因芯片技術(shù)的多重PCR檢測系統(tǒng)GENOGATE（Toyo Seikan公司）。

本次應(yīng)用的實驗過程如下圖所示：

1.使用Coriolis® µ空氣采樣器收集包括真菌孢子的微粒；

2.篩選真菌孢子并提取DNA；

3.熒光標(biāo)記；

4.使用通用引物進行多重PCR擴增；

5.使用相同的引物對首輪PCR處理的樣品再一次進行多重PCR擴增；

6.熒光檢測分析目的基因。

通過與ITS序列分析獲得已知的結(jié)果對比，來驗證本次應(yīng)用中這個超快速檢測系統(tǒng)的性能，實驗結(jié)果如下：表1為分析基因芯片技術(shù)的檢測下限，兩輪PCR都檢測到了不同種類的真菌；表2對比分析了兩種方法，一種為用Coriolis® µ空氣采樣器，用多重PCR分析；第二種為使用air IDEAL采集器收集培養(yǎng)的真菌菌落，然后用ITS序列分析結(jié)果。結(jié)果顯示兩種方法都檢測到了不同種類的真菌，而使用Coriolis® µ和基因芯片分析的方法檢測到的菌落形成單位都要遠高于第二種方法，分別為750cfu/62cfu和469cfu/79cfu；使用Coriolis® µ的空氣流速的可達300L/min，air IDEAL僅100L/min。使用Coriolis® µ空氣采樣器和基因芯片技術(shù)的超快速檢測系統(tǒng)，不需要培養(yǎng)過程，成功檢測到不同種類的氣傳真菌。

即使在嚴(yán)重污染的環(huán)境下，結(jié)合Coriolis® µ空氣采樣器和GENOGATE（多重PCR平臺）可以有效地分析不同種類的氣傳真菌。這個系統(tǒng)在評估環(huán)境污染、特殊有害真菌檢測、早期發(fā)現(xiàn)室內(nèi)環(huán)境變化方面是一個有效的工具，當(dāng)然這個系統(tǒng)也同樣應(yīng)用于化妝品、食品、飲品行業(yè)以及學(xué)術(shù)研究領(lǐng)域。

Coriolis µ空氣微生物采樣器

>>在液體樣品中采集空氣中的顆粒

>>適用于病毒、細(xì)菌、霉菌、花粉、孢子

>>適合后續(xù)培養(yǎng)和分子生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)檢測方法