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制備色譜提純構(gòu)成 ：

傳統(tǒng)的制備色譜一般由一臺(tái)可以連續(xù)輸送液體的恒流泵、紫外檢測(cè)儀與色譜柱構(gòu)成，其中重要的部件是價(jià)格不一，款式多樣的色譜柱，這也是影響終制備效果的關(guān)鍵性環(huán)節(jié)。柱子有多種類型，不僅材質(zhì)不一，填料也有很多學(xué)問，下面簡(jiǎn)要的說說關(guān)于柱子的一些情況:

各種規(guī)格的玻璃柱子在實(shí)驗(yàn)室里頭很容易得到，而且價(jià)格低廉，但玻璃柱子致命的弱點(diǎn)是它能承受的壓力很小，且非常容易破碎。當(dāng)由于壓力太小而導(dǎo)致流動(dòng)相流速很慢的時(shí)候，高位液面或加高壓空氣(或者氮?dú)?的采用是一個(gè)簡(jiǎn)單的解決辦法。在底下加真空，也能在一定程度上解決這個(gè)問題。

不銹鋼柱子具有良好的耐腐蝕、抗壓力性能，但其價(jià)格相對(duì)很貴。如果，只有很小的分離，REN務(wù)且經(jīng)費(fèi)也允許，市面上直徑為1cm的小型制備柱就是好的選擇。

有機(jī)玻璃柱子也能抗壓力耐腐蝕，相對(duì)不銹鋼柱子而言，它是半透明的，可以看到液體的運(yùn)行狀態(tài)，對(duì)有色的物質(zhì)其特點(diǎn)就更為突出。

硅膠、鍵合固定相(如C18)、離子交換樹脂、聚酰胺、氧化鋁、凝膠等都可以作為色譜柱的填料。有不少文獻(xiàn)報(bào)道，對(duì)填料可以進(jìn)行一下處理提高了分離效果，如，對(duì)硅膠進(jìn)行的(或緩沖液)處理。

1制備色譜提純到底是什么?

(1)分析色譜的目的，是分析出混合物中一個(gè)(或者幾個(gè))純物質(zhì)的含量。目的，是從混合物中得到純物質(zhì)。

為了加快分離的時(shí)間與提高分離的效率，進(jìn)樣品量很大，導(dǎo)致柱子的分離負(fù)荷的相應(yīng)加大，也就必須加大色譜柱填料，增大直徑和長(zhǎng)度，使用的相對(duì)多的流動(dòng)相。

然而，當(dāng)色譜柱上樣品負(fù)載加大的時(shí)候，往往導(dǎo)致柱效急劇下降而得不到純的產(chǎn)品。要解決容量與柱子效果之間的矛盾，對(duì)重現(xiàn)性也要考慮。從經(jīng)濟(jì)上來說。要爭(zhēng)取少用填料，少用溶劑，要盡可能多的得到產(chǎn)品。

(2)樣品的前處理:

柱子由于處理的樣品多，比分析柱子更容易受污染，所以，必要的前處理就顯得非常的必要。萃取、過濾、結(jié)晶、固相萃取等簡(jiǎn)單的分離方法，如果用得上，而且還不是很麻煩，就要盡可能多的采用以去掉雜質(zhì)。

(3)固定相的選擇：

硅膠、鍵合固定相(如C18)、離子交換樹脂、聚酰胺、氧化鋁、凝膠等都可以作為色譜柱的填料。有不少文獻(xiàn)報(bào)道，對(duì)填料可以進(jìn)行一下處理提高了分離效果，如，對(duì)硅膠進(jìn)行的(或緩沖液)處理。

(4)裝柱方法的選擇根據(jù)固定相顆粒度和柱子的尺寸，采用不同的裝柱方法，往往裝填越好分離效果越好。裝柱效果跟填料的顆粒度關(guān)系很大，顆粒度的減少會(huì)導(dǎo)致裝柱的難度。一般來說，顆粒直徑小于20-30um的固定相采用濕法裝填。所謂"敲擊-裝填"技術(shù)適用于顆粒直徑大于25um的固定相。濕法的目的是迫使相對(duì)稀松的固定相懸漿以高速裝入色譜柱子，從而減少空隙的形成。然而，當(dāng)柱直徑大于20mm，所加壓力為30-40bar時(shí)，高壓懸漿裝填技術(shù)就變得十分復(fù)雜。為將小顆粒固定相裝入更大得制備型色譜柱，可采用柱長(zhǎng)壓縮技術(shù)。這種方法，先將固定相懸漿(或偶爾是干填充物)裝入柱中加壓，利用物理方法將其壓緊。壓緊的方法有兩種:徑向壓縮和軸向壓縮。濕法裝柱需要一定的設(shè)備，在柱子填完后，應(yīng)用有柱效的測(cè)量，對(duì)柱效低的柱子應(yīng)該重填。

(5)流動(dòng)相的選擇：

除了和分析色譜同樣的考慮外，在選用流動(dòng)相時(shí)，要考慮色譜分離后面加有旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)等二次分離操作。一般來說，不宜采用高毒性溶劑，對(duì)多元溶劑要盡可能的少用。

如果產(chǎn)品中含有大量溶劑，溶劑的純度也要考慮在其中。

(6)加樣的方法：

可以采用以下方法之一進(jìn)樣。-用注射器進(jìn)樣-用旋轉(zhuǎn)閥進(jìn)樣-通過六通閥進(jìn)樣-通過主泵進(jìn)樣-通過輔泵進(jìn)樣-固體上樣

(7)泵的選用：

生產(chǎn)的廠商很多。根據(jù)有無脈沖、能承受的大壓力、控制的精度、售后服務(wù)等來選擇泵。

(8)檢測(cè)器的選用：

一般的分析池的大允許流速僅為5mL/min或者10mL/min。而專門的制備池的大允許流速可為150mL/min。有時(shí)，采用旁路分離管，將少量流體導(dǎo)入分析池進(jìn)行檢測(cè)，是一個(gè)不錯(cuò)的辦法，但其濃度的誤差會(huì)相對(duì)較大。

(9)組分保留時(shí)間的估計(jì)：

用分析柱子在同等色譜條件下(同樣的固定相和流動(dòng)相)測(cè)定保留時(shí)間后，按照單一組分的線流速(不是體積流速)一定，通過計(jì)算可以知道組分的大致保留時(shí)間區(qū)域。

分析譜圖的峰形狀，對(duì)確定保留時(shí)間也有很大的參考價(jià)值。

(10)產(chǎn)品的收集：

手工餾分收集費(fèi)時(shí)費(fèi)力，自動(dòng)餾分收集器有很大的方便。許多實(shí)驗(yàn)室和工廠都采用了餾分收集器。

(11)超載、邊緣切割、中心切割、放大技術(shù)與非線性效用：

因?yàn)闆]有必要達(dá)到分析色譜那樣的分離度，可以在一定范圍內(nèi)大大加大進(jìn)樣的濃度和體積。在做分離的時(shí)候，也有一些分析色譜的時(shí)候，不能用到的技巧。因?yàn)槠P(guān)系，不在這里敘述。

(12)柱轉(zhuǎn)換技術(shù)：

通過接頭或者閥門，實(shí)現(xiàn)柱子的簡(jiǎn)單延長(zhǎng)，或者比較方便地實(shí)現(xiàn)對(duì)其中一個(gè)(或幾個(gè))組分的精制。

(13)比較新的技術(shù)：

模擬移動(dòng)床可以連續(xù)進(jìn)樣，并可以利用邊緣切割效用，而且采用了柱切換技術(shù)，能更好的利用溶劑和填料，已經(jīng)應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)。其理論和技術(shù)也日益完善。

迎頭色譜、超臨界流體色譜、逆流色譜環(huán)形色譜、氣相等在科研和工業(yè)生產(chǎn)中也得到了應(yīng)用。