詳細(xì)介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號 |
脊髓組織 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 神經(jīng)元細(xì)胞樣 | YS-01X7220 |
細(xì)胞簡介:
兔脊髓神經(jīng)元分離自脊髓組織;脊髓是細(xì)細(xì)的管束狀的神經(jīng)結(jié)構(gòu),位于脊柱的椎管內(nèi)且被脊椎保護(hù);是源自腦的中樞神經(jīng)系統(tǒng)延伸部分。中樞神經(jīng)系統(tǒng)的細(xì)胞依靠復(fù)雜的聯(lián)系來處理傳遞信息。脊髓的主要功能是傳送腦與外周之間的神經(jīng)信息。人和脊椎動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一部分,在椎管里面,上端連接延髓,兩旁發(fā)出成對的神經(jīng),分布到四肢、體壁和內(nèi)臟。脊髓的內(nèi)部有一個H形(蝴蝶型)灰質(zhì)區(qū),主要由神經(jīng)細(xì)胞構(gòu)成;在灰質(zhì)區(qū)周圍為白質(zhì)區(qū),主要由有髓神經(jīng)纖維組成;脊髓是許多簡單反射的中樞。脊髓兩旁發(fā)出許多成對的神經(jīng)(稱為脊神經(jīng))分布到全身皮膚、肌肉和內(nèi)臟器官。脊髓是周圍神經(jīng)與腦之間的通路,也是許多簡單反射活動的低級中樞。按脊神經(jīng)的出入可把脊髓也分為相應(yīng)的31節(jié),31對脊神經(jīng)就是由不同的脊椎發(fā)出的。神經(jīng)系統(tǒng)最基本的結(jié)構(gòu)和功能單位是神經(jīng)元,即神經(jīng)細(xì)胞,其大小和外觀在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中差異很大。但都具有胞體和樹突、軸突。胞體又叫核周體,內(nèi)含神經(jīng)絲、微管、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、游離核糖體和一個有明顯核仁的核。一些大神經(jīng)元突起的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)可用Nissl染色顯示,在光鏡下是灰藍(lán)色斑塊狀,稱為尼氏小體。樹突和軸突是神經(jīng)元的突起,能在神經(jīng)元之間傳遞電沖動,突起的大小和形態(tài)各不相同,很難用常規(guī)的顯微鏡鑒別。脊髓組織內(nèi)含有大量膠質(zhì)細(xì)胞,神經(jīng)元含量少,分離純化難度大,且脊髓神經(jīng)元細(xì)胞是高度分化的終末細(xì)胞,不能分裂增殖,培養(yǎng)要求高。剛接種的脊髓神經(jīng)元呈圓形,體積小,透亮,無突起。培養(yǎng)2-3d,可見胞體增大,突起增多延長;培養(yǎng)6-7d,細(xì)胞體大飽滿,突起明顯增加延長并交織成網(wǎng),光暈明顯,立體感強。培養(yǎng)20d后,死亡細(xì)胞明顯增加,細(xì)胞出現(xiàn)內(nèi)空泡,突起粗細(xì)不均,甚至脫壁,發(fā)生細(xì)胞崩解。
方法簡介:
公司實驗室分離的兔脊髓神經(jīng)元采用膠原酶&聯(lián)合消化法、神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結(jié)合化學(xué)試劑抑制法制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的兔脊髓神經(jīng)元經(jīng)β-Tubulin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
包被條件 PLL(0.1mg/ml)
培養(yǎng)基 含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 神經(jīng)元細(xì)胞樣
傳代特性 屬于終末分化細(xì)胞;屬于不增殖細(xì)胞群
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。
② 消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠IP-10(mouse IP-10) 作用: ELISA 規(guī)格: 進(jìn)口分裝
小鼠8異前列腺素(mouse 8-iso-PG) 作用: ELISA 規(guī)格: 進(jìn)口分裝
小鼠白三烯B4(mouse LTB4) 作用: ELISA 規(guī)格: 進(jìn)口分裝
小鼠瘦素(mouse Leptin) 作用: ELISA 規(guī)格: 進(jìn)口分裝
小鼠骨堿性0酸酶(BALP)試劑盒
Human growth hormone releasing peptide (GHRP) ELISA Kit 人生長激素釋放多肽(GHRP)試劑盒
Humangasicinhibitorypolypeptide,GIPELISAKit 人胃抑素(GIP)試劑盒 進(jìn)口分裝
Humanai-ribonucleoproteinAibody,RNP-Ab試劑盒人抗核糖核蛋白抗體(RNP-Ab)試劑盒
植物細(xì)胞原生質(zhì)體化學(xué)轉(zhuǎn)染試劑盒10次
HumaumornecrosisfactorsolublereceptorⅠ,TNFsR-ⅠELISAKit人壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)試劑盒
Rad52抗體
淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒LCMV L抗體
NRG1重組狗 NRG1-alpha 蛋白 (EGF Domain, Fc 標(biāo)簽) Protein
NOS-1(bNOS:neuronal NOS:nNOS:Nitric Oxide synthase-1 0.5mgNOS-1(bNOS:neuronal NOS:nNOS:Nitric Oxide synthase-1) 合成酶-1(抗原)
SMOC1重組人 SMOC1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
FAM3C Protein Human 重組人 FAM3C / ILEI 蛋白
CES1D Protein Mouse 重組小鼠 CES3 / Carboxylesterase-3 / CES1D 蛋白 (His 標(biāo)簽)
NOS-1(bNOS:neuronal NOS:nNOS:Nitric Oxide synthase-1 0.5mgNOS-1(bNOS:neuronal NOS:nNOS:Nitric Oxide synthase-1) 合成酶-1(抗原)
FAM3C Protein Human 重組人 FAM3C / ILEI 蛋白
NRG1重組狗 NRG1-alpha 蛋白 (EGF Domain, Fc 標(biāo)簽) Protein
CES1D Protein Mouse 重組小鼠 CES3 / Carboxylesterase-3 / CES1D 蛋白 (His 標(biāo)簽)
SMOC1重組人 SMOC1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
兔脊髓神經(jīng)元細(xì)胞大鼠粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GMCSF)試劑盒 ,英文名: GMCSF ELISA Kit
Mouse Helicobacter pylori IgG (Hp-IgG) ELISA Kit 小鼠幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)試劑盒
RatPeroxisomeProliferator-activatedreceptorγ,PPAR-γELISAKit 大鼠過氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)試劑盒 進(jìn)口分裝
CLIAKitforGAG(Humanglycosaminoglycan)ELISAKit人糖胺聚糖試劑盒
細(xì)胞果糖-1,6-二0酸縮酶(ALD)定量試劑盒20次
RatProstaglandinE2,PG-E2ELISAKit大鼠前列腺素E2(PGE2)試劑盒
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細(xì)胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細(xì)胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行;
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進(jìn)行分瓶試驗;
4、長期培養(yǎng)時,淋巴細(xì)胞中要加入生長因子,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長;
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時才能進(jìn)行。