詳細介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
骨髓 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 樹突狀 | YS-01X7565 |
細胞簡介:
人骨髓樹突狀分離自骨髓;骨髓是機體的造血組織,位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動物的骨髓分兩種:紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細胞、血小板和各種白細胞。血小板有止血作用,白細胞能殺滅與抑制各種病原體,包括細菌、病毒等;某些淋巴細胞能制造抗體。因此,骨髓不但是造血器官,它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中,是一種海綿狀的組織,能產(chǎn)生血細胞的骨髓略呈紅色,稱為紅骨髓。出生時,紅骨髓充滿全身骨髓腔,隨著年齡增大,脂肪細胞增多,相當部分紅骨髓被黃骨髓取代,最后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。骨髓DC細胞是由骨髓單核細胞誘導(dǎo)而成的;DC細胞,全稱樹突狀細胞(DC),是近年來倍受們關(guān)注的專職抗原呈遞細胞(APC),能攝取、加工及呈遞抗原,啟動T細胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。由美國學(xué)者Steinman于1973年在淋巴結(jié)中發(fā)現(xiàn),從脾臟中分離出一類與粒細胞、巨噬細胞和淋巴細胞形態(tài)和功都不同的白細胞,因其細胞膜向外伸出,形成與神經(jīng)細胞軸突相似的膜性樹狀突起,故而命名為樹突狀細胞。未成熟DC具有較強的遷移能力,成熟DC能有效激活初始型T細胞,處于啟動、調(diào)控、并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié)。
原代細胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,應(yīng)將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行;
3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進行分瓶試驗;
4、長期培養(yǎng)時,淋巴細胞中要加入生長因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,以利細胞生長;
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行。
方法簡介:
公司實驗室分離的人骨髓DC采用密度梯度離心法分離骨髓單個核細胞、培養(yǎng)過程添加細胞因子誘導(dǎo)而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的人骨髓樹突狀細胞(DC細胞)經(jīng)CD86免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 半貼半懸浮
細胞形態(tài) 樹突狀
傳代特性 屬于高度分化細胞;屬于不增殖細胞群
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
兔子Ⅲ型前膠原肽試劑盒 兔子Ⅲ型前膠原肽試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 兔子Ⅲ型前膠原肽試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:試劑盒(進口分裝),產(chǎn)品別名:兔子Ⅲ型前膠原肽試劑盒、兔子Ⅲ型前膠原肽試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月。
猴載脂蛋白B100試劑盒 猴載脂蛋白B100試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 猴載脂蛋白B100試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:試劑盒(進口分裝),產(chǎn)品別名:猴載脂蛋白B100試劑盒、猴載脂蛋白B100試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月。
猴載脂蛋白A1試劑盒 猴載脂蛋白A1試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 猴載脂蛋白A1試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:試劑盒(進口分裝),產(chǎn)品別名:猴載脂蛋白A1試劑盒、猴載脂蛋白A1試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月。
猴胰島素試劑盒 猴胰島素試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 猴胰島素試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:試劑盒(進口分裝),產(chǎn)品別名:猴胰島素試劑盒、猴胰島素試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月。
小鼠β內(nèi)啡肽(β-EP)ELISA 試劑盒 96T/48T
Rat growth factor (GH) ELISA Kit 大鼠生長因子(GH)試劑盒
HumanpreptinELISAKit 人preptin試劑盒 96T/48T 進口分裝
Humanchaperonin10,CPN10試劑盒人伴侶蛋白10(CPN10)試劑盒規(guī)格:96T/48T
轉(zhuǎn)基因玉米MON863品系基因定性試劑盒20次
humanserine/cysteinepeptidaseinhibitorcladeAmember3G,Serpina3gELISAKit人絲蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子進化枝3G(Serpina3g)試劑盒規(guī)格:96T/48T
妊娠特異性糖蛋白3抗體
組織相容性抗原DOB抗體
GGT1重組大鼠 GGT1 蛋白 Protein
Fibulin 1 衰老關(guān)鍵蛋白抗原 0.5mgFibulin 1 衰老關(guān)鍵蛋白抗原
HSF1重組人 HSF1 / HSTF1 蛋白 Protein
GPR114 Protein Human 重組人 GPR114 蛋白 (Fc 標簽)
EPHA4 Protein Mouse 重組小鼠 EphA4 / HEK8 蛋白 (Fc 標簽)(Fc 標簽)
Fibulin 1 衰老關(guān)鍵蛋白抗原 0.5mgFibulin 1 衰老關(guān)鍵蛋白抗原
GPR114 Protein Human 重組人 GPR114 蛋白 (Fc 標簽)
GGT1重組大鼠 GGT1 蛋白 Protein
EPHA4 Protein Mouse 重組小鼠 EphA4 / HEK8 蛋白 (Fc 標簽)(Fc 標簽)
HSF1重組人 HSF1 / HSTF1 蛋白 Protein
人骨髓樹突狀細胞(DC細胞)大鼠血管生成素1(ANGPT1)試劑盒 ,英文名: ANGPT1 ELISA Kit
Mouse aial naiuretic peptide (Pro-ANP) ELISA Kit 小鼠前心肽(Pro-ANP)試劑盒
Mousemaixmetalloproteinase7,MMP-7ELISAkit 小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforHumanbeta2glycoprotein,Beta2-GPELISAKit人β2糖蛋白
細胞D-葡萄糖激酶法定量試劑盒20次
ELISAKitFAS/CD95大鼠凋亡相關(guān)因子