詳細(xì)介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號 |
睪丸組織 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細(xì)胞樣 | YS-01X7494 |
細(xì)胞簡介:
大鼠睪丸支持分離自睪丸;睪丸支持細(xì)胞又稱Sertoli細(xì)胞,在體內(nèi)呈不規(guī)則的高錐體形,細(xì)胞基部附著在基膜上,頂部伸至曲精小管腔面。它是生精細(xì)胞的支架,為其提供必需的營養(yǎng)物質(zhì),能合成與分泌雄激素結(jié)合蛋白,為其提供高濃度的雄激素環(huán)境等,還具有構(gòu)成血-睪屏障,形成睪丸內(nèi)微環(huán)境,調(diào)節(jié)發(fā)生等功能。睪丸支持細(xì)胞是睪丸的主要組成細(xì)胞,能分泌多種生長因子和免疫抑制因子,不僅可為提供營養(yǎng)支持和免疫保護(hù),也能對其他細(xì)胞,如胰島和神經(jīng)細(xì)胞提供營養(yǎng)支持,而且當(dāng)其與胰島或神經(jīng)細(xì)胞共移植時,也能夠為這些細(xì)胞提供免疫保護(hù),提高植活率。因此,睪丸支持細(xì)胞在細(xì)胞移植中具有廣泛的應(yīng)用前景。制備高活率的Sertoli不僅對Sertoli的基礎(chǔ)研究有重要價值,而且在發(fā)生等領(lǐng)域有重要意義。
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細(xì)胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細(xì)胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行;
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進(jìn)行分瓶試驗;
4、長期培養(yǎng)時,淋巴細(xì)胞中要加入生長因子,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長;
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時才能進(jìn)行。
方法簡介:
公司實驗室分離的大鼠睪丸支持采用膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的大鼠睪丸支持經(jīng)Fas-L免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。
② 消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
植物血球凝集素M 10mg
PHA-M 25mg
吩嗪甲酯 1g
PhenMethosulfate 5g
豬B細(xì)胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA 試劑盒
Human ai monocyte aibody (AMA) ELISA Kit 人抗單核細(xì)胞抗體(AMA)試劑盒
Porcinetelomerase,TEELISAKit 豬端粒酶(TE)試劑盒 進(jìn)口分裝
CLIAKitforAGPA/PCA(Humanai-gasicparietalcellaibody)ELISAKit人抗胃壁細(xì)胞抗體
血液人類巨細(xì)胞病毒蛋白酶(HCMVPROTEASE)活性熒光淬滅法定量試劑盒20次
Mouseansforminggrowthfactorβ2,TGFβ2ELISAKit小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)試劑盒
1號染色體開放閱讀框130抗體
單羧酸轉(zhuǎn)運蛋白5抗體
IL13RA1重組大鼠 IL13RA1 蛋白 Protein
Ghrelin 28 腦腸肽28 0.5mgGhrelin 28 腦腸肽28
FCGR2B重組人 CD32b / FCGR2B 蛋白 (His & AVI 標(biāo)簽), Biotinylated Protein
AGER Protein Human 重組人 AGER / RAGE 蛋白 (His 標(biāo)簽)
CXADR Protein Mouse 重組小鼠 CXADR 蛋白 (His 標(biāo)簽)
Ghrelin 28 腦腸肽28 0.5mgGhrelin 28 腦腸肽28
AGER Protein Human 重組人 AGER / RAGE 蛋白 (His 標(biāo)簽)
IL13RA1重組大鼠 IL13RA1 蛋白 Protein
CXADR Protein Mouse 重組小鼠 CXADR 蛋白 (His 標(biāo)簽)
FCGR2B重組人 CD32b / FCGR2B 蛋白 (His & AVI 標(biāo)簽), Biotinylated Protein
大鼠睪丸支持細(xì)胞小鼠可溶性Endoglin(ENG/sCD105)ELISA 試劑盒
Rat ai IgE receptor aibody ELISA Kit 大鼠抗IgE受體抗體試劑盒
Humanfetalhemoglobin,HBFELISAKit 人胎兒血紅蛋白(HBF)試劑盒 進(jìn)口分裝
Humanalpha-fetoproteinLensculinarisaggliin2,AFP-L2試劑盒人小扁結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體2(AFP-L2)試劑盒
植物氨含量熒光定量試劑盒20次
Mouse16-αHydroxyesogen1,16-αOHE-1ELISAKit小鼠16α羥基雌同1(16-αOHE-1)試劑盒