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詳細(xì)介紹
商品屬性：
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號 |
肝臟組織 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 內(nèi)皮細(xì)胞樣 | YS-01X7162 |
細(xì)胞簡介：
大鼠肝竇內(nèi)皮細(xì)胞分離自肝臟組織；肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個器官，并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用；肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁。肝臟是機(jī)體內(nèi)臟里最大的器官，位于機(jī)體中的腹部位置，在右側(cè)橫隔膜之下，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方，胃的上方。肝臟是機(jī)體消化系統(tǒng)中最大的消化腺，為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官，又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機(jī)體位置和形態(tài)結(jié)構(gòu)：肝臟位于右上腹，隱藏在右側(cè)膈下和肋骨深面，大部分肝為肋弓所復(fù)蓋，僅在腹上區(qū)、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁，肝上面則與膈及腹前壁相接。肝竇內(nèi)皮細(xì)胞（SEC）是肝臟內(nèi)所占比例最高的非實質(zhì)細(xì)胞，位于肝竇腔與肝細(xì)胞之間，具有物質(zhì)轉(zhuǎn)運、吞噬、抗原提呈、免疫耐受等功能。SEC由于擁有一般細(xì)胞所沒有的窗孔結(jié)構(gòu)、細(xì)胞間連結(jié)松散、內(nèi)皮下缺少基底膜而使其具有高度通透性，從而達(dá)到快速交換各種大小分子的目的。肝在遭到多種病原侵襲時，肝竇內(nèi)皮細(xì)胞窗孔逐漸減少或消失，內(nèi)皮下基膜形成，產(chǎn)生類似于連續(xù)型毛細(xì)血管的結(jié)構(gòu)，這一過程稱為肝竇毛細(xì)血管化。它由多種因素引起，其過程極復(fù)雜，在多種肝病的發(fā)病前期階段均有出現(xiàn)，近年來受到廣泛關(guān)注。
方法簡介：
公司實驗室分離的大鼠肝竇內(nèi)皮采用混合酶灌流消化、反復(fù)低速離心、密度梯度離心法，并通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
公司實驗室分離的大鼠肝竇內(nèi)皮經(jīng)CD31、CD14免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞傳代及凍存：
| 細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
| 如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。
② 消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品：
脂肪酶（LPS）試劑盒 可見分光光度法 50管/48樣
醇脫氫酶（ADH）試劑盒 紫外分光光度法 50管/48樣
脂氧合酶（LOX）試劑盒 紫外分光光度法 50管/48樣
酰基轉(zhuǎn)移酶（AAT）試劑盒 可見分光光度法 10管/9樣
植物茉莉酸甲酯(MeJA)ELISA 試劑盒
Human ai nucleolus aibody (ANA) ELISA Kit 人抗核仁抗體(ANA)試劑盒
Porcineinsulin-likegrowthfactors-1,IGF-1ELISAKit 豬胰島素樣生長因子1(IGF-1)試劑盒 進(jìn)口分裝
CLIAKitforaFABP(Humanadipocytefattyacid-bindingprotein)ELISAKit人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白
血液血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶2(ACE2)活性熒光定量試劑盒20次
MouseSuperOxidaseDimase,SODELISAKit小鼠超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒
棕櫚?；さ鞍?span>7抗體
叉頭蛋白R2抗體
BMP2重組斑馬魚 BMP-2 / BMP2A 蛋白 Protein
TRAF2/TNF-R2 (TNF receptor-associated factor 2 0.5mlTRAF2/TNF-R2 (TNF receptor-associated factor 2) 壞死因子受體相關(guān)因子2抗原
ACVRL1重組人 ALK-1 / ACVRL1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
ACTR3 Protein Human 重組人 ACTR3 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)
TFPI Protein Human 重組人 TFPI 蛋白 (His 標(biāo)簽)
TRAF2/TNF-R2 (TNF receptor-associated factor 2 0.5mlTRAF2/TNF-R2 (TNF receptor-associated factor 2) 壞死因子受體相關(guān)因子2抗原
ACTR3 Protein Human 重組人 ACTR3 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)
BMP2重組斑馬魚 BMP-2 / BMP2A 蛋白 Protein
TFPI Protein Human 重組人 TFPI 蛋白 (His 標(biāo)簽)
ACVRL1重組人 ALK-1 / ACVRL1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
大鼠肝竇內(nèi)皮細(xì)胞小鼠腦腸肽(BGP/Gehrelin)ELISA 試劑盒
Rat basic fibroblast growth factor (bFGF) ELISA Kit 大鼠堿性成纖維生長因子(bFGF)試劑盒
HumaeplicationproteinA,RPA-70ELISAKit 人復(fù)制蛋白A(RPA-70)試劑盒 進(jìn)口分裝
Human5-Nucleotidase,5-試劑盒人5核苷酸酶(5-)試劑盒
真菌天青曙紅(Azure-eosinate)染色試劑盒50次
Mouseai-oligodendrocyte-myelinglycoproteinaibody,OMgp-AbELISAKit小鼠少突膠質(zhì)細(xì)胞髓鞘糖蛋白抗體(OMgp-Ab)試劑盒
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件：
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性；
2、細(xì)胞接種時濃度要稍大一些，至少為5×108細(xì)胞/L；
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng)；
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
6、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落，漂?。?/p>
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀，應(yīng)將原代細(xì)胞換液；
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時，應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細(xì)胞；
2、短期培養(yǎng)，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行；
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi)，進(jìn)行分瓶試驗；
4、長期培養(yǎng)時，淋巴細(xì)胞中要加入生長因子，白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清，以利細(xì)胞生長；
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次；
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時才能進(jìn)行。
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