詳細(xì)介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號 |
脾臟組織 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 不規(guī)則細(xì)胞 | YS-01X7537 |
細(xì)胞簡介:
大鼠脾淋巴分離自脾臟組織;脾臟是機(jī)體最大的免疫器官,占全身淋巴組織總量的25%,含有大量的淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,是機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫的中心。位于左季肋區(qū)后外方肋弓深處,與9-11肋相對,長軸與第10肋一致。膈面與膈肌和左肋膈竇相鄰,前方有胃,后方與左腎、左腎上腺毗鄰,下端與結(jié)腸脾溝相鄰,地柔軟的網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞器官。淋巴細(xì)胞(lymphocyte)白細(xì)胞的一種,由淋巴器官產(chǎn)生,機(jī)體免疫應(yīng)答功能的重要細(xì)胞成分。淋巴器官根據(jù)其發(fā)生和功能的差異,可分為中樞淋巴器官(又名初級淋巴器官)和周圍淋巴器官(又名次級淋巴器官)兩類。前者包括胸腺、腔上囊或其相當(dāng)器官(有人認(rèn)為在哺乳動(dòng)物是骨髓)。它們無須抗原刺激即可不斷增殖淋巴細(xì)胞,成熟后將其轉(zhuǎn)送至周圍淋巴器官。后者包括脾、淋巴結(jié)等。成熟淋巴細(xì)胞需依賴抗原刺激而分化增殖,繼而發(fā)揮其免疫功能。
方法簡介:
見說明
質(zhì)量檢測:
本公司生產(chǎn)的大鼠脾淋巴采用機(jī)械研磨法結(jié)合密度梯度離心法制備而來,細(xì)胞總量約為1×10^6cells/瓶;細(xì)胞純度可達(dá)95%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
RPMI-1640、FBS、淋巴細(xì)胞生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
人重去甲上腺素(NE-B)檢測試劑盒 96T/48T
人血管生長因子(TAF)檢測試劑盒 96T/48T
人相關(guān)抗原(TAA)檢測試劑盒 96T/48T
人特異性抗原(TSA)檢測試劑盒 96T/48T
豚鼠促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)檢測試劑盒 ,英文名: ACTH ELISA Kit
Many people immunoglobulin receptor (poly-IgR) ELISA Kit 人多免疫球蛋白受體(poly-IgR)檢測試劑盒
rabbitN-terminalprocollagenⅢpropeptide,PⅢNPELISAKit 兔子Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforBeta-HexA(MouseBeta-hexosaminidaseA)ELISAKit小鼠β氨基己糖苷酶A
細(xì)菌細(xì)胞色素氧化酶活性比色法定量檢測試劑盒20次
rabbitHyaluronicacid,HAELISAKit兔子透明質(zhì)酸(HA)檢測試劑盒規(guī)格:96T/48T
羊抗人球蛋白A
PE標(biāo)記人CD45RB單克隆抗體
FZD5重組人 Frizzled-5 / FZD5 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein
神經(jīng)生長因子(NGF)重組蛋白 Recombinant Nerve Growth Factor (NGF)
TRIP10重組人 TRIP10 / Cip4 蛋白 Protein
IL3RA Protein Human 重組人 IL3RA / CD123 蛋白
HA Protein Influenza 重組甲型流感 H1N1 (A/Ohio/07/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白
神經(jīng)生長因子(NGF)重組蛋白 Recombinant Nerve Growth Factor (NGF)
IL3RA Protein Human 重組人 IL3RA / CD123 蛋白
FZD5重組人 Frizzled-5 / FZD5 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein
HA Protein Influenza 重組甲型流感 H1N1 (A/Ohio/07/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白
TRIP10重組人 TRIP10 / Cip4 蛋白 Protein
大鼠脾淋巴細(xì)胞豬肝細(xì)胞生長因子(HGF)ELISA 試劑盒
Human Ureaplasma urealyticum aibody (UU-Ab) ELISA Kit 人解脲脲原體抗體(UU-Ab)檢測試劑盒
PorcineEndothelialniicoxidesyhase3,eNOS-3ELISAKit 豬內(nèi)皮型合成酶3(eNOS-3)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforAlpha-bungarotoxin,Alpha-BGTELISAKitα-銀環(huán)蛇毒素
血液賴(lysine)含量化學(xué)比色法定量檢測試劑盒20次
NudeMouseProteinPhosphatase,PPELISAKit裸鼠蛋酸酶(PP)檢測試劑盒規(guī)格:96T/48T
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂?。?/p>
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí),應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行;
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進(jìn)行分瓶試驗(yàn);
4、長期培養(yǎng)時(shí),淋巴細(xì)胞中要加入生長因子,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長;
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行。