操作步驟:

1）使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2）根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3）加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
4）甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5）每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6）甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7）每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
8）取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9）在450nm波長處測定各孔的OD值。

試劑和樣本的控制方法：
一、試劑
1.試劑的選擇：國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān)，我司嚴(yán)格按照進(jìn)行，已獲得國家承認(rèn)的“三證”，每一個產(chǎn)品都有對應(yīng)的批號，只要客戶提前下單，我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品，不必?fù)?dān)心會有過期的試劑。我司的試劑，值得您選擇。
2.試劑的準(zhǔn)備：先將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20-30 min后，再進(jìn)行測定，使試劑盒在使用前與室溫平衡，這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度，以滿足后面的測定需求。
二、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素：包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等；
類風(fēng)濕因子的控制方法：
①用F(ab)2替代完整的IgG；
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理；
③檢測抗原時，可用加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解；
補(bǔ)體的控制方法：
①用EDTA稀釋標(biāo)本；
②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活；
2.外源性干擾因素：包括標(biāo)本溶血、細(xì)菌污染、保存時間過長或凝固不全等；
控制方法：采血時規(guī)范操作，采集的血液勿用力震蕩，以防溶血；收集標(biāo)本時采用無菌試管，經(jīng)檢測后再低溫凍存；保存時間不宜過久，檢測時盡量采用新鮮標(biāo)本；對于凝固不全的血標(biāo)本可適當(dāng)加入抗凝劑，并放入37℃水中1 h，待充分凝固后再離心分離血清。

具有如下優(yōu)點(diǎn)：
一、高效、靈敏、特異的抗體；
二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性；
三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；
四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型；
五、性價比非常好，節(jié)省實驗經(jīng)費(fèi)。

SM(sphingomyelin)ELISAKit人鞘脂CAS:402460進(jìn)口、國產(chǎn)規(guī)格：15mg

UFC(urinaryfreecortisol)ELISAKit人尿游離皮質(zhì)CAS:14056進(jìn)口、國產(chǎn)規(guī)格：25mg

ASCA(Anti-Saccharomycescerevisiaeantibody)ELISAKit人抗釀酒酵母抗體CAS:5961進(jìn)口、國產(chǎn)規(guī)格：200mg

VLA4(verylateappearingantigen4)ELISAKit人遲現(xiàn)抗原4CAS:進(jìn)口、國產(chǎn)規(guī)格：25mg

AO(AcrineOrange)ELISAKit人吖橙CAS:進(jìn)口、國產(chǎn)規(guī)格：50mg

MTX(methotrexate)ELISAKit人喋呤CAS:131181進(jìn)口、國產(chǎn)規(guī)格：75mg

PABA(para-aminobenzoicacid)ELISAKit人對氨基CAS:進(jìn)口、國產(chǎn)規(guī)格：25mg

LPA(L-phenylalanine)ELISAKit人氨CAS:526998進(jìn)口、國產(chǎn)規(guī)格：50mg

Irna(ImmuneRNA)ELISAKit人免疫核糖核CAS:NA進(jìn)口、國產(chǎn)規(guī)格：10mg

Beta-Nph(Beta-naphthol)ELISAKit人βCAS:90021進(jìn)口、國產(chǎn)規(guī)格：1vial

BLI(Beta-Lactamaseinhibitors)ELISAKit人β內(nèi)酰酶抑制CAS:1457812進(jìn)口、國產(chǎn)規(guī)格：100mg

Gal(Alpha-galactoyl)ELISAKit人α半糖基抗體CAS:進(jìn)口、國產(chǎn)規(guī)格：2mg

AlphaNAG(AlphaN-acetylglucosaminidase)ELISAKit人αN已酰氨基葡糖苷酶CAS:進(jìn)口、國產(chǎn)規(guī)格：1．0mg

Alpha2-PI(Alpha2-plasmininhititor)ELISAKit人α2纖溶酶抑制物CAS:14057進(jìn)口、國產(chǎn)規(guī)格：200mg

人高香草(HVA)ELISAKit人高香草CAS:1070079進(jìn)口、國產(chǎn)規(guī)格：150mg
TRAIL R1 elisa試劑盒商陸黃素Fura-2, pentasodium salt  cAMPβ-乳球蛋白檢測試盒

商陸皂甙 BIndo-1, AM GAPC環(huán)腺苷檢測試盒

蛇根亭Indo-1, AMTNF-γ乳房鏈球菌檢測試盒

蛇莓甙AIndo-1, AM *1 mM solution in anhydrous DMSO*  IFN-β腫瘤壞死因子γ檢測試盒

蛇紋石素Indo-1, pentapotassium salt  EG-Abβ干擾素檢測試盒

伸筋草萜寧Indo-1, pentasodium salt β-lactamase細(xì)粒棘球絳抗體檢測試盒

測定步驟：
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
 2.加樣體積要準(zhǔn)確
3.管底加樣，不能加在管壁上
4.加樣時不能產(chǎn)生氣泡
2.溫浴 
1.加標(biāo)本后和加結(jié)合物后，應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫 度的水浴箱。
2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。
3.為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后，反應(yīng)的時間和溫度通常不做嚴(yán)格要求。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實驗臺上，以便 不時觀察，待對照管顯色適當(dāng)時，即可終止酶反應(yīng)。
3.洗滌 
1.洗滌在ELISA過程中不是反應(yīng)步驟，但卻 是決定實驗成敗的關(guān)鍵。
2.目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
4.讀板 
1.陰性對照顏色極淺，在定性測定中一般 可采用目視比色。
2.如用酶標(biāo)儀測定結(jié)果，準(zhǔn)確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標(biāo)儀的質(zhì) 量和軟件的算法。