化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
商品屬性：
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
皮膚 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 內(nèi)皮細胞樣 | YS-01X8478 |
細胞簡介：
兔真皮微血管內(nèi)皮分離自真皮組織；真皮，位于表皮深層，向下與皮下組織相連，真皮結(jié)締組織的膠原纖維和彈性纖維互相交織在一起，埋于基質(zhì)內(nèi)。其內(nèi)分布著各種結(jié)締組織細胞和大量的膠原纖維彈性纖維，使皮膚既有彈性，又有韌性。其由兩層組成——乳頭層與網(wǎng)狀層。真皮的結(jié)構(gòu)組成是膠原蛋白、彈性纖維以及基質(zhì)。微血管內(nèi)皮細胞（MEC）在炎癥反應(yīng)、腫瘤生長、創(chuàng)面愈合過程中起著非常重要的作用。在創(chuàng)面愈合研究領(lǐng)域，由于表皮細胞、真皮成纖維細胞體外培養(yǎng)技術(shù)的成熟，人們對這兩種細胞早已進行了大量深入的研究。與之相比，對參與創(chuàng)面愈合過程的另一種主要細胞——真皮微血管內(nèi)皮細胞，則因其體外分離培養(yǎng)技術(shù)的困難而使相關(guān)的研究受限。
原代細胞的培養(yǎng)條件：
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性；
2、細胞接種時濃度要稍大一些，至少為5×108細胞/L；
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng)；
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
6、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落，漂??；
7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀，應(yīng)將原代細胞換液；
8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時，應(yīng)將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞；
2、短期培養(yǎng)，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行；
3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi)，進行分瓶試驗；
4、長期培養(yǎng)時，淋巴細胞中要加入生長因子，白血病細胞中要加入少量的原患者血清，以利細胞生長；
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次；
6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行。
方法簡介：
實驗室分離的兔真皮微血管內(nèi)皮采用膠原酶-混合消化法結(jié)合密度梯度離心法、后通過內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
實驗室分離的兔真皮微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息：
包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：內(nèi)皮細胞樣
傳代特性：可傳2-3代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔真皮微血管內(nèi)皮體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞傳代及凍存：
| 細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
| 如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠甲狀腺素抗體(TAb)試劑盒
小鼠甲狀腺素(T4)試劑盒
小鼠甲狀腺球蛋白(TG)試劑盒
小鼠甲狀腺過氧化物酶(TPO)試劑盒
酪蛋白激酶NKF3抗體
鋅指蛋白547抗體
AARS重組小鼠 AARS / alanyl-tRNA synthetase 蛋白 Protein
T-細胞免疫調(diào)節(jié)因子1(TCIRG1)重組蛋白 Recombinant T-Cell, Immune Regulator 1 (TCIRG1)
CXCL11重組人 I-TAC / CXCL11 蛋白 Protein
DAPK3 Protein Human 重組人 DAPK3 / ZIPK 蛋白 (GST 標(biāo)簽)
EPCAM Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 / 恒河猴 EpCAM / TRO僀?僀
CD72分子(CD72)重組蛋白 Recombinant Cluster Of Differentiation 72 (CD72)
DAPK3 Protein Human 重組人 DAPK3 / ZIPK 蛋白 (GST 標(biāo)簽)
CD6重組小鼠 CD6 / TP120 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein
CST3 Protein Rat 重組大鼠 Cystatin C / CST3 蛋白
AZGP1重組人 Alpha-2-glycoprotein / AZGP1 蛋白 Protein
小鼠淋巴細胞因子ELISA pcr檢測試劑盒
Human prostaglandin E1 (PGE1) ELISA Kit 人前列腺素E1(PGE1)試劑盒
Humanpituitaryadenylatecyclaseactivatingpolypeptide,PACAPELISAKit 人垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽(PACAP)pcr檢測試劑盒分裝
Humanadenylylcyclase1,AC-1試劑盒人腺苷酸環(huán)化酶1(AC-1)試劑盒規(guī)格：96T/48T
植物ATP生物發(fā)光法定量試劑盒50次
Mousealkalinephosphatase,ALPELISAKit小鼠堿性0酸酶(ALP)試劑盒規(guī)格：96T/48T
兔真皮微血管內(nèi)皮細胞大鼠載脂蛋白C2(APOC2)試劑盒 ，英文名： APOC2 ELISA Kit
Mouse phospho exacellular signal regulated kinase (pERK) ELISA Kit 小鼠0酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(pERK)試劑盒
MouseLeptieceptor,LR/Ob-RELISAKIT 小鼠苗條素受體(LR/Ob-R)pcr檢測試劑盒分裝
CLIAKitforHumanfilameoushemagglinin,FHAELISAKit人絲狀血球凝集素
細胞/組織高粘性多聚賴載玻片制備試劑盒5次(50至100片)
ELISAKitMMP-7大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶7
化工儀器網(wǎng)