詳細(xì)介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號(hào) |
關(guān)節(jié)囊 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細(xì)胞樣 | YS-01X8500 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
小鼠關(guān)節(jié)囊成纖維分離自關(guān)節(jié)囊組織;關(guān)節(jié)囊(articular capsule)是由結(jié)締組織構(gòu)成的膜囊,附著于關(guān)節(jié)的周圍,密封關(guān)節(jié)腔。關(guān)節(jié)囊的壁共有兩層:外層為纖維層;內(nèi)層為滑膜層。纖維層實(shí)際上是一個(gè)連結(jié)骨的骨膜向另一骨骨膜的移行。纖維層厚而堅(jiān)韌,由致密結(jié)締組織構(gòu)成,含有豐富的血管和神經(jīng)。其淺層纖維多呈縱行排列;深層纖維主要為環(huán)行纖維。纖維層的厚薄,各個(gè)關(guān)節(jié)不相同,即是在同一關(guān)節(jié)中,各部也不一致一般在運(yùn)動(dòng)范圍小的或是負(fù)重較大的關(guān)節(jié)中,都較厚而緊張,相反,于運(yùn)動(dòng)靈活的關(guān)節(jié),則較薄而松弛。有的關(guān)節(jié)囊的部分纖維囊缺如,僅一層滑膜層;有的部分明顯增厚,形成韌帶?;颖《釢?rùn),是由疏松結(jié)締組織構(gòu)成,襯在纖維層內(nèi)面,周緣附著在關(guān)節(jié)軟骨的邊緣。它朝向關(guān)節(jié)腔的內(nèi)面光而發(fā)亮,此面上蓋有一層內(nèi)皮細(xì)胞?;は蜿P(guān)節(jié)腔分泌滑液,滑液是稍粘稠而透明的液體,可減少關(guān)節(jié)中相連骨的摩擦,是一種滑潤(rùn)劑。滑膜表面可形成絨毛或皺襞突入關(guān)節(jié)腔內(nèi)。有時(shí)滑膜層可以穿過纖維層呈囊狀向外膨出,形成滑膜囊,常位于肌腱與骨面之間。有時(shí)滑膜層突出不明顯,僅呈深窩狀,稱為囊狀隱窩。成纖維細(xì)胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來;成纖維細(xì)胞較大,輪廓清楚,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛,細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng),在一定條件下,它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化;成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好,懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁,其中部分開始伸出偽足,表現(xiàn)為小的突起;6h后細(xì)胞基本貼壁,伸展成梭形,胞核清晰,分布較均勻,散在生長(zhǎng),不聚集成團(tuán);細(xì)胞生長(zhǎng)迅速,5-7天即呈融合狀態(tài),細(xì)胞排列緊密,有的交叉重疊生長(zhǎng),平坦、胞體較大,細(xì)胞質(zhì)透明,細(xì)胞核較大,呈橢圓形,顏色淡。細(xì)胞融合,并彼此連接成網(wǎng)狀;細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
方法簡(jiǎn)介:
實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠關(guān)節(jié)囊成纖維采用混合酶消化結(jié)合差速貼壁法制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè):
實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠關(guān)節(jié)囊成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:基礎(chǔ)培養(yǎng)基,含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):成纖維細(xì)胞樣
傳代特性:可傳1-2代左右
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
小鼠關(guān)節(jié)囊成纖維體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài):
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性,可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
(NO)測(cè)定試劑盒(還原酶法)
超氧化物歧化酶(SOD)分型測(cè)試盒(羥胺法)
微量二(MDA)測(cè)定試劑盒(TBA法)
—S轉(zhuǎn)移酶(GSH-ST)試劑盒(比色法)
Dysferlin蛋白抗體
視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤結(jié)合蛋白6抗體
SFRP2重組小鼠 sFRP2 蛋白 Protein
C-jun/AP-1 (Oncoprotein C-jun:active protein 1 0.5mgC-jun/AP-1 (Oncoprotein C-jun:active protein 1) 原癌基因蛋白(活化蛋白1)(抗原)
APEX1重組人 APEX1 / AP / APEx / Ref-1 蛋白 Protein
CAMK1G Protein Human 重組人 CAMK1G / CLICK III / CaMKIgamma 蛋白 (His僀?僀
C-jun/AP-1 (Oncoprotein C-jun:active protein 1 0.5mgC-jun/AP-1 (Oncoprotein C-jun:active protein 1) 原癌基因蛋白(活化蛋白1)(抗原)
CAMK1G Protein Human 重組人 CAMK1G / CLICK III / CaMKIgamma 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)
SFRP2重組小鼠 sFRP2 蛋白 Protein
MCPT1 Protein Mouse 重組小鼠 MCPT1 蛋白
APEX1重組人 APEX1 / AP / APEx / Ref-1 蛋白 Protein
鴨胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA pcr檢測(cè)試劑盒
Human ai hCG aibody (AhCGAb) ELISA Kit 人抗人絨毛膜抗體(AhCGAb)試劑盒
HumanMotilin,MTLELISAKit 人胃動(dòng)素(MTL)pcr檢測(cè)試劑盒分裝
CLIAKitforAcSDKPELISAKit大鼠N-乙?;?span>-絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-脯
血影細(xì)胞膜熒光染色試劑盒20次
Mouseplateletfactor3,PF3ELISAKit小鼠血小板因子3(PF-3)試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠關(guān)節(jié)囊成纖維細(xì)胞大鼠肌鈣蛋白T(Tn-T)試劑盒 ,英文名: Tn-T ELISA Kit
Rabbit Bcl-2 associated X protein (BAX) ELISA Kit 兔Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)試劑盒
牛(BCV)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
CLIAKitforMouseSlit2ELISAKit小鼠Slit2
體液鈣離子濃度比色法定量試劑盒20次
ELISAKit6-K-PG人6同前列腺素
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí),應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行;
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進(jìn)行分瓶試驗(yàn);
4、長(zhǎng)期培養(yǎng)時(shí),淋巴細(xì)胞中要加入生長(zhǎng)因子,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長(zhǎng);
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行