化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
商品屬性：
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號(hào) |
眼球 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 梭形、多角形 | YS-01X7371 |
細(xì)胞簡介：
小鼠小梁網(wǎng)分離自眼球組織；小梁網(wǎng)由角膜基質(zhì)纖維、后界膜和角膜內(nèi)皮向后擴(kuò)展而成，覆蓋在鞏膜靜脈竇的內(nèi)側(cè)。小梁網(wǎng)細(xì)胞在眼內(nèi)壓調(diào)節(jié)中起著關(guān)鍵作用；小梁網(wǎng)細(xì)胞內(nèi)有特定的神經(jīng)遞質(zhì)和神經(jīng)肽受體，其中包括腎上腺素、乙酰和神經(jīng)肽Y。青光眼是由于眼內(nèi)壓力升高而造成的一種逆致盲眼病，小梁網(wǎng)細(xì)胞的體外培養(yǎng)是青光眼病因?qū)W研究的重要手段之一。在小梁網(wǎng)細(xì)胞中，一長串的血管活性多肽和生長因子能夠觸發(fā)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制，小梁網(wǎng)細(xì)胞可合成不同類型的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白以及金屬蛋白酶。形態(tài)學(xué)觀察可見，剛從組織塊長出的原代細(xì)胞，形態(tài)各異，多數(shù)呈星狀或不規(guī)則形。細(xì)胞有胞突，核橢圓形，胞體肥大，胞漿豐富，且可見吞噬顆粒。隨著細(xì)胞的增生及相互融合為單層，細(xì)胞的形態(tài)趨于一致。胞漿的色素顆粒及胞突消失，排列緊密呈類似上皮細(xì)胞的扁橢圓形或不規(guī)則形。胞體透亮，包膜清晰。
方法簡介：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠小梁網(wǎng)采用組織貼塊法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠小梁網(wǎng)經(jīng)NSE（神經(jīng)元特異性烯醇化酶）免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞傳代及凍存：
| 細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
| 如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。
?、?消化培養(yǎng)法
③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對(duì)于懸浮生長的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠酶(CA)試劑盒 96T/48T
小鼠胎盤生長因子(PLGF)試劑盒 96T/48T
小鼠羧甲基賴酸（CML）試劑盒 96T/48T
小鼠髓0脂堿性蛋白(MBP)試劑盒 96T/48T
小鼠糖皮質(zhì)類固醇受體(GR)ELISA 試劑盒 96T/48T
The formation of red blood cells of rat prolactin receptor (EPOR) ELISA Kit 大鼠紅細(xì)胞生成素受體(EPOR)試劑盒
Humaerminaldeoxynucleotidylansferase,TdTELISAKit 人末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Chickenverylowdensitylipoprotein,VLDL試劑盒雞極低密度脂蛋白(VLDL)試劑盒規(guī)格：96T/48T
載玻片細(xì)胞TUBULIN蛋白表達(dá)熒光顯微鏡試劑盒10/20次
MouseErythropoietin,EPOELISAKit小鼠紅細(xì)胞生成素(EPO)試劑盒規(guī)格：96T/48T
AF680標(biāo)記的環(huán)指蛋白15抗體
白介素17F抗體
MMP9重組人 MMP-9 / CLG4B 蛋白 Protein
拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ(TOP2)重組蛋白 Recombinant Topoisomerase II (TOP2)
XG重組人 Glyco蛋白 Xg / PBDX 蛋白 Protein
CHI3L1 Protein Human 重組人 CHI3L1 / YKL40 蛋白
HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/Japanese white-eye/Hong Kong/1038/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白
拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ(TOP2)重組蛋白 Recombinant Topoisomerase II (TOP2)
CHI3L1 Protein Human 重組人 CHI3L1 / YKL40 蛋白
MMP9重組人 MMP-9 / CLG4B 蛋白 Protein
HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/Japanese white-eye/Hong Kong/1038/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白
XG重組人 Glyco蛋白 Xg / PBDX 蛋白 Protein
小鼠小梁網(wǎng)細(xì)胞大鼠蛋白激酶Cθ(PKCθ)試劑盒 ，英文名： PKCθ ELISA Kit
N terminal brain naiuretic peptide (-proBNP) ELISA Kit 人N端前腦素(-proBNP)試劑盒
Ratsolubleierleukin-1receptorⅡ,IL-1sRⅡELISAkit 大鼠白介素1可溶性受體Ⅱ(IL-1sRⅡ)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforCyclin-D1ELISAKit大鼠細(xì)胞周期素D1
細(xì)胞色素P450亞酶CYP2E(AH)活性熒光定量試劑盒20次
Ratferritin,FEELISAKit大鼠鐵蛋白(FE)試劑盒規(guī)格：96T/48T
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件：
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性；
2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些，至少為5×108細(xì)胞/L；
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng)；
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
6、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落，漂浮；
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀，應(yīng)將原代細(xì)胞換液；
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞；
2、短期培養(yǎng)，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行；
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi)，進(jìn)行分瓶試驗(yàn)；
4、長期培養(yǎng)時(shí)，淋巴細(xì)胞中要加入生長因子，白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清，以利細(xì)胞生長；
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次；
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行
化工儀器網(wǎng)