詳細(xì)介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號 |
腎動脈 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細(xì)胞樣 | YS-01X8427 |
細(xì)胞簡介:
兔腎動脈平滑肌分離自腎動脈組織;腎動脈的分支為葉間動脈,穿行于腎柱內(nèi),上行至皮質(zhì)與髓質(zhì)交界處,形成與腎表面平行的弓狀動脈。小葉間動脈向被膜發(fā)出毛細(xì)血管,并向周圍的腎小體發(fā)出入球小動脈,進(jìn)入腎小囊后形成球形的毛細(xì)血管網(wǎng),再匯集成出球小動脈,出腎小體。直小動脈分支形成毛細(xì)血管網(wǎng),再匯合成直小靜脈,入弓狀靜脈、葉間靜脈,后匯合成腎靜脈經(jīng)腎門出腎,注入下腔靜脈。腎動脈既是腎的營養(yǎng)血管,又是腎的機(jī)能血管,與腎泌尿機(jī)能密切相關(guān)。腎動脈在腎實質(zhì)內(nèi)形成兩個毛細(xì)血管網(wǎng):腎小球毛細(xì)血管網(wǎng),血壓較高,利于血漿濾過形成原尿;球后毛細(xì)血管網(wǎng),血壓較低,利于腎小管的重吸收。腎動脈平滑肌細(xì)胞是腎動脈的重要結(jié)構(gòu)細(xì)胞之一,在機(jī)體的正常生理過程中發(fā)揮著重要作用。腎動脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后,可見細(xì)胞貼壁伸展,細(xì)胞形態(tài)大小不一,呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形,核卵圓形、居中;2周后細(xì)胞匯合,多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形,胞漿豐富,有分枝狀突起,細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,高低起伏;細(xì)胞密度低時,常交織成網(wǎng)狀;密度高時,則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長較快,4-6天即可匯合,并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點。
方法簡介:
實驗室分離的兔腎動脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
實驗室分離的兔腎動脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):成纖維細(xì)胞樣
傳代特性:可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔腎動脈平滑肌體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
人載脂蛋白H(Apo-H)試劑盒
人載脂蛋白E(Apo-E)試劑盒
人載脂蛋白C3(APO-C3)試劑盒
人載脂蛋白C2(Apo-C2)試劑盒
淀粉樣肽前體蛋白抗體
缺氧誘導(dǎo)基因1B蛋白抗體
KNG1重組小鼠 KNG1 / BDK / kininogen-1 蛋白 Protein
Beta-Amyloid 1-42 CT β淀粉樣肽 1-42 (C端多肽 0.1mgBeta-Amyloid 1-42 CT β淀粉樣肽 1-42 (C端多肽)
SCN3B重組人 SCN3B 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein
ITGA6 & ITGB1 Protein Human 重組人 ITGA6 & ITGB1 Heterodimer 蛋白
SLC3A2 Protein Rat 重組大鼠 SLC3A2 / 僀?僀
Beta-Amyloid 1-42 CT β淀粉樣肽 1-42 (C端多肽 0.1mgBeta-Amyloid 1-42 CT β淀粉樣肽 1-42 (C端多肽)
ITGA6 & ITGB1 Protein Human 重組人 ITGA6 & ITGB1 Heterodimer 蛋白
KNG1重組小鼠 KNG1 / BDK / kininogen-1 蛋白 Protein
SLC3A2 Protein Rat 重組大鼠 SLC3A2 / CD98 蛋白
SCN3B重組人 SCN3B 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein
豚鼠白介素1β(IL1B)試劑盒 ,英文名: IL1B ELISA Kit
Human ubiquitin conjugating enzyme (E2/UBCE) ELISA Kit 人泛素結(jié)合酶(E2/UBCE)試劑盒
rabbitIerleukin6,IL-6ELISAKit 兔子白介素6(IL-6)pcr檢測試劑盒分裝
CLIAKitforBeta-CG(HumanChorionicGonadoophinBeta)ELISAKit人絨毛膜β
細(xì)菌乙醇脫氫酶總活性(NDMA)比色法定量試劑盒20次
rabbitfollicle-stimulatinghormone,FSHELISAKit兔子促卵泡素(FSH)試劑盒規(guī)格:96T/48T
兔腎動脈平滑肌細(xì)胞人優(yōu)球蛋白(EL)ELISA 試劑盒
Human ansforming growth factor alpha (TGF- alpha) ELISA Kit 人轉(zhuǎn)化生長因子α(TGF-α)試劑盒
HumanArgyrophilicnucleolarorganizerregionproteins,Ag-NORsELISAKit 人核仁形成區(qū)嗜銀蛋白(Ag-NORs)pcr檢測試劑盒分裝
HumanIerferonαAibody,IFNα-Ab試劑盒人抗α干擾素抗體(IFNα-Ab)試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織精(arginine)含量酶連續(xù)循環(huán)反應(yīng)比色法定量試劑盒20次
Humanisociatedehydrogenase,ICDELISAKit人異檸檬酸脫氫酶(ICD)試劑盒規(guī)格:96T/48T
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細(xì)胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細(xì)胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行;
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進(jìn)行分瓶試驗;
4、長期培養(yǎng)時,淋巴細(xì)胞中要加入生長因子,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長;
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時才能進(jìn)行