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Curiosis血細(xì)胞計數(shù)板除了要會用，還要注意這些事情！
閱讀：2528 發(fā)布時間：2020-12-11
Curiosis血細(xì)胞計數(shù)板在顯微鏡下直接計數(shù)，是一種常用的微生物計數(shù)方法。此法的優(yōu)點(diǎn)是直觀、快速。將經(jīng)過適當(dāng)稀釋的菌懸液（或孢子懸液）放在血細(xì)胞計數(shù)板載玻片與蓋玻片之間的計數(shù)室中，在顯微鏡下進(jìn)行計數(shù)。由于計數(shù)室的容積是一定的（0.1或0.4mm2），所以可以根據(jù)在顯微鏡下觀察到的微生物數(shù)目來換算成單位體積內(nèi)的微生物總數(shù)目。由于此法計得的是活菌體和死菌體的總和，故又稱為總菌計數(shù)法。適用于稀釋的菌懸液（或孢子懸液），即液體培養(yǎng)基中菌體的計數(shù)。
Curiosis血細(xì)胞計數(shù)板操作步驟：
1．稀釋
將釀酒酵母菌懸液進(jìn)行適當(dāng)稀釋，菌液如不濃，可不必稀釋。
2．鏡檢計數(shù)室
在加樣前，先對計數(shù)板的計數(shù)室進(jìn)行鏡檢。若有污物，則需清洗后才能進(jìn)行計數(shù)。
3．加樣品
將清潔干燥的血細(xì)胞計數(shù)板蓋上蓋玻片，再用無菌的細(xì)口滴管將稀釋的釀酒酵母菌液由蓋玻片邊緣滴一小滴（不宜過多），讓菌液沿縫隙靠毛細(xì)滲透作用自行進(jìn)入計數(shù)室，一般計數(shù)室均能充滿菌液。（此處浙科版課本P73有誤）注意不可有氣泡產(chǎn)生。
4．顯微鏡計數(shù)
靜止5分鐘后，將血細(xì)胞計數(shù)板置于顯微鏡載物臺上，先用低倍鏡找到計數(shù)室所在位置，然后換成高倍鏡進(jìn)行計數(shù)。在計數(shù)前若發(fā)現(xiàn)菌液太濃或太稀，需重新調(diào)節(jié)稀釋度后再計數(shù)。一般樣品稀釋度要求每小格內(nèi)約有5—10個菌體為宜。每個計數(shù)室選4或5個中格中的菌體進(jìn)行計數(shù)。
鏡檢計數(shù)方法：①方格內(nèi)細(xì)胞的計數(shù)順序為左上→右上→右下→左下。②壓在方格線上的細(xì)胞只計左線和上線上的細(xì)胞數(shù)。③酵母細(xì)胞若有粘連，要數(shù)出團(tuán)塊中的每一個細(xì)胞。④出芽酵母的芽體體積若超過細(xì)胞體積的1/2，則算獨(dú)立個體。⑤計數(shù)總數(shù)不少于300個細(xì)胞。
5．清洗血細(xì)胞計數(shù)板
使用完畢后，將血細(xì)胞計數(shù)板在水籠頭上用水柱沖洗，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干。鏡檢，觀察每小格內(nèi)是否有殘留菌體或其他沉淀物。若不干凈，則必須重復(fù)洗滌至干凈為止。
Curiosis血細(xì)胞計數(shù)板注意事項：
（1）進(jìn)行計數(shù)前，應(yīng)先將試管搖勻，目的是使酵母菌在培養(yǎng)液中混合均勻，以減少計數(shù)誤差。
（2）顯微鏡計數(shù)時，對于壓在小方格界線上的酵母菌，應(yīng)取相鄰兩邊及頂角計數(shù)。
（3）若一個小方格內(nèi)酵母菌數(shù)量過多，難以數(shù)清時，則可將培養(yǎng)液稀釋一定倍數(shù)后再計數(shù)。
（4）本實驗無另設(shè)對照實驗，酵母菌每天的數(shù)量變化可形成前后對照。
（5）血細(xì)胞計數(shù)板使用后，切勿用硬物洗刷，可采用浸泡和沖洗的方法清洗。