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Oxoid 李斯特菌增菌肉湯

李斯特氏菌屬（Listeria ）普遍存在于環(huán)境中，其中單核細胞增生李斯特氏菌是人類致病菌。李斯特菌經(jīng)常在即食食品、熱狗、熟食、未消 毒的乳制品、冰淇淋、蔬菜、發(fā)酵臘腸、生肉、家禽等食品中風(fēng)險較大。在干燥，25%鹽濃度，冷藏，冷凍和熱處理的情況下能存活。

Oxoid提供各種李斯特菌增菌肉湯、選擇性培養(yǎng)基、顯色培養(yǎng)基：

緩沖李斯特菌增菌肉湯（BLEB）Buffered Listeria Enrichment Broth(BLEB)用于檢測單增李斯特菌的選擇性增菌培養(yǎng)基，適用于環(huán)境樣品和發(fā)酵產(chǎn)品，CM0897加添加劑SR0141E或SR0213E：

緩沖李斯特菌增菌肉湯 CM0897：

配方表：

*可根據(jù)標(biāo)準需要自行調(diào)整

李斯特菌選擇性增菌添加劑 SR0141E：

改良李斯特菌選擇性增菌添加劑 SR0213E：

使用方法：

將23.5g的CM0897加入到500ml無菌水中，混勻以溶解。將1瓶SR0141E或SR0213E按照說明書溶解，加入上述培養(yǎng)基中。121℃滅菌15分鐘。冷卻到50℃，混勻倒平板。

技術(shù)要點：

1、將25g或25ml樣品加入225ml緩沖李斯特菌增菌肉湯中，如果需要的話就混勻；

2、經(jīng)過24和48小時培養(yǎng)后，將緩沖李斯特菌增菌肉湯中的微生物轉(zhuǎn)移到李斯特菌瓊脂平板上：（1）直接倒注在平板上（2）將1ml的BLEB加入9ml的0.5的KOH中，混勻，涂布在平板上。

注意，合適的再培養(yǎng)基的瓊脂有：Oxford李斯特菌選擇性培養(yǎng)基，CM0856加SR0140E；PALCAM培養(yǎng)基，CM0877B加SR0150E。

質(zhì)控：

陽性對照 Listeria monocytogenes ATCC® 19117   渾濁生長

陰性對照 Enterococcus faecalis ATCC® 29212    抑制

李斯特菌選擇性增菌培養(yǎng)基  (Listeria Selective Enrichment Medium)

符合FDA配方的李斯特菌增菌培養(yǎng)基，被推薦用于從食品中選擇性增菌李斯特菌

CM0862B加添加劑（SR0141E，SR0213E或SR0149A三選一）：

李斯特菌增菌肉湯 CM0862：

*可根據(jù)標(biāo)準需要自行調(diào)整配方

改良李斯特菌選擇性增菌添加劑 SR0149A，每小瓶配2.25L培養(yǎng)基：

產(chǎn)品描述：

Oxoid 李斯特菌增菌肉湯CM0862的配方是由Lovett發(fā)表的配方而來，被推薦用于從食品中選擇性增菌李斯特菌，這種增菌方法可以使生牛奶中低于10 cfu/ml的李斯特菌復(fù)蘇。

為了獲得更高的提取率，將培養(yǎng)1天，2天，7天后的增菌肉湯接種到瓊脂培養(yǎng)基上，Agello的文獻中顯示，7天增菌培養(yǎng)后，牛奶和奶制品中的受環(huán)境限制的李斯特菌可以獲得更好的復(fù)蘇率。

技術(shù)要點同上文

質(zhì)控：

陽性對照 Listeria monocytogenes ATCC® 7644     渾濁生長

陰性對照 Enterococcus faecalis ATCC® 29212    抑制

Fraser肉湯 (Fraser Broth)

用于從食品和環(huán)境樣本中分離李斯特菌的二次選擇性診斷增菌肉湯，CM0895加添加劑SR0156E：

Half Fraser肉湯 (Half Fraser Broth)

李斯特菌的選擇性初增肉湯，CM0895加添加劑SR0166：

Fraser肉湯基礎(chǔ) CM0895

配方表

 *可跟進標(biāo)準需要自行調(diào)整配方，pH不隨添加劑的加入而改變      

Fraser添加劑 SR0156E，每小瓶配500ml培養(yǎng)基：

將28.7g的CM0895加入500ml無菌水中，混勻溶解，121℃滅菌15分鐘，冷卻到50℃后加入已按照說明書溶解好的1瓶SR0156E，混勻后倒平板。

Half Fraser添加劑 SR0166：

將12.9g的CM0895加225ml無菌水中，混勻溶解，121℃滅菌15分鐘，冷卻到50℃后加入已按照說明書溶解好的1瓶SR0166E，混勻后倒平板?；蛘哂?29.0g的CM0895配1瓶SR0166G。

產(chǎn)品描述：

Fraser肉湯是對UVM二次增菌肉湯（USDA-FSIS 標(biāo)準）的改進版，它含有檸檬酸鐵銨和氯化鋰，會使培養(yǎng)基變黑。培養(yǎng)基變黑是有李斯特菌生長的證據(jù)。所有的Fraser增菌產(chǎn)物都要經(jīng)過瓊脂平板再次培養(yǎng)。

Fraser肉湯對于檢測環(huán)境和食品樣品中的李斯特菌非常準確，而使用UVM肉湯檢測肉類中的李斯特菌。

Half Fraser肉湯是對Fraser肉湯的改良版，它將奈啶酸和鹽酸吖啶黃的含量減半，在ISO的李斯特菌檢測方法中用來作為初步增菌肉湯。

Half Fraser肉湯（不含檸檬酸鐵銨） CM1053：

*可根據(jù)標(biāo)準需要自行調(diào)整

UVM李斯特菌選擇性增菌培養(yǎng)基  Listeria Selective Enrichment Media (UVM Formulations)

兩步驟、選擇性增菌方法（USDA-FSIS方法）,CM0863B加添加劑SR0142或SR0143，對于肉類中的李斯特菌檢出率高。

UVM 李斯特菌增菌肉湯基礎(chǔ) CM0863：

*可根據(jù)標(biāo)準需要調(diào)整配方

SR0142E UVM初增肉湯，每小瓶配500ml培養(yǎng)基

SR0143E UVM二次增菌肉湯，每小瓶配500ml培養(yǎng)基

李斯特菌ONE肉湯 (ONE Broth-Listeria)

從食品和環(huán)境樣本中對李斯特菌選擇性增菌。是Oxoid 李斯特菌快速培養(yǎng)檢測方法中的選擇性增菌肉湯。

李斯特菌ONE肉湯可以在24小時內(nèi)對食品樣品中的李斯特菌進行增菌，非常適合肉類中檢測李斯特菌。也是 Oxoid Listeria Precis™快速檢測方法中的增菌方法

李斯特菌ONE肉湯基礎(chǔ) CM1066：

SR0234的配方廠家未有公開。

Oxford 李斯特菌選擇性瓊脂 Listeria Selective Agar (Oxford Formulation)

用于檢測李斯特菌的選擇性診斷培養(yǎng)基，經(jīng)過李斯特菌選擇性增菌培養(yǎng)后，使用CM0856加添加劑SR0140或SR0206進行再培養(yǎng)：

Oxford 李斯特菌選擇性瓊脂基礎(chǔ) CM0856：

配方表

*可根據(jù)標(biāo)準需要調(diào)整配方

SR0140E，每小瓶配500ml培養(yǎng)基：

SR0206E，每小瓶配500ml培養(yǎng)基：

PALCAM瓊脂 (PALCAM Agar)

用于檢測李斯特菌屬的選擇性和診斷培養(yǎng)基，CM0877加添加劑SR0150：

PALCAM瓊脂基礎(chǔ) CM0877：

*可根據(jù)標(biāo)準需要調(diào)整配方

PALCAM選擇性添加劑 SR0150：

使用方法：

每500ml無菌水配34.5g的CM0877干粉，*溶解后121℃滅菌15分鐘，冷卻到50℃，加入已經(jīng)按照說明書溶解的1瓶SR0140E，混勻倒平板。

如果給培養(yǎng)基加入卵黃乳液（比如SR0047），可以使培養(yǎng)基增加受損李斯特菌的恢復(fù)率。

產(chǎn)品描述：

PALCAM培養(yǎng)基由于添加了氯化鋰，頭孢他啶，多粘菌素B，鹽酸吖啶黃，因此具有更高的選擇性， 它通過雙重鑒別指標(biāo)使單增李斯特菌更容易被鑒別和診斷出來。

技術(shù)要點：

1、在增菌肉湯培養(yǎng)的基礎(chǔ)上再轉(zhuǎn)移到瓊脂上培養(yǎng)，將1接種環(huán)的選擇性增菌肉湯接種到PALCAM瓊脂上；

2、在微需氧條件下，37℃培養(yǎng)48小時；

3、48小時候檢查李斯特菌的典型菌落：2mm直徑， 褐綠色菌落，具有黑色凹陷中心，在櫻桃紅色培養(yǎng)基背景下有一圈黑色外環(huán)。

Brilliance李斯特菌顯色瓊脂 (Brilliance Listeria Agar)

選擇性分離和鑒別單增李斯特菌和李斯特屬，作為分離培養(yǎng)基用于Oxoid李斯特菌Precis方法中。使用CM1080加添加劑SR0227E和SR0228E。

使用方法：

稱取33.6g的CM1080到480ml無菌水中，混勻，121℃滅菌15分鐘，冷卻到46℃，分別加入已經(jīng)按照說明書溶解好的SR0227E和SR0228E各1小瓶。混勻，倒平板。

Brilliance李斯特菌顯色瓊脂基礎(chǔ) CM1080：

配方表：

*可根據(jù)標(biāo)準需要自行調(diào)整配方

Brilliance李斯特菌顯色選擇性添加劑 SR0227E：

Brilliance李斯特菌顯色鑒別添加劑 SR0228E：

產(chǎn)品描述：

單增李斯特菌是最常見的致病性李斯特菌，而且已經(jīng)表現(xiàn)在對人和動物的致病性上。有一些伊凡諾夫李斯特菌Listeria ivanovii 也有磷脂酶活性， 雖然伊凡諾夫李斯特菌是對動物的主要病原菌，但是也有一些菌株也表現(xiàn)出對人的感染能力。實驗證明這款培養(yǎng)基比PALCAM和Oxford培養(yǎng)基對于分離單增李斯特菌更好。

Brilliance李斯特菌顯色瓊脂中的X-葡萄糖苷顯色劑對李斯特菌屬進行初步鑒定，這種顯色劑可由β-葡萄糖苷酶裂解，這種酶在李斯特菌屬里面常見，其他具有這種酶的微生物被培養(yǎng)基中的其他成分抑制，比如腸球菌被氯化鋰，多粘菌素B和奈啶酸抑制，兩性霉素抑制樣品中的霉菌酵母。單增李斯特菌和伊凡諾夫李斯特菌可以產(chǎn)生磷脂酶，可以水解卵磷脂，在菌落外圍產(chǎn)生不透明的白色環(huán)，因此被進一步鑒別出來。

質(zhì)控：

陽性對照：Listeria monocytogenes ATCC®7644   生長良好，綠色/藍色菌落帶有外環(huán)

Listeria innocua ATCC®33090        生長良好，綠色/藍色菌落沒有外環(huán)

陰性對照：Enterococcus feacalis ATCC®29212   抑制

李斯特菌顯色瓊脂（ISO） Chromogenic Listeria Agar (ISO)

簡稱OCLA瓊脂，用于李斯特菌和單增李斯特菌的選擇性顯色培養(yǎng)基，符合ISO推薦配方（ISO 11290-1:1997 ）

李斯特菌顯色瓊脂基礎(chǔ)（ISO） CM1084：

配方表

*可根據(jù)標(biāo)準需要自行調(diào)整

OCLA (ISO) SELECTIVE SUPPLEMENT SR0226E：

OCLA (ISO) DIFFERENTIAL SUPPLEMENT SR0244E:

使用方法：

改良ISO配方： 稱取34.5g的CM1084溶解于480ml無菌水中，混勻，121℃滅菌15分鐘，冷卻到46℃，添加按照說明書溶解好的1小瓶SR0226E，再添加1小瓶SR0228E，混勻倒平板。

ISO配方：稱取34.5g的CM1084溶解于480ml無菌水中，混勻，121℃滅菌15分鐘，冷卻到50℃，添加按照說明書溶解好的1小瓶SR0226E，再添加1小瓶SR0244E，混勻倒平板。

技術(shù)要點：

李斯特菌顯色瓊脂（ISO）可以用在多個標(biāo)準的增菌方法之后，比如ISO，NMKL，F(xiàn)DA，NFNOR(UNI 03/04-04/05)等。

以下方法是對ISO 11290-1:1997 方法的總結(jié)：

1、添加25g食品樣品到225ml的Half Fraser Broth CM0895 & SR0166，混勻至少30秒；

2、將上述培養(yǎng)基在30℃培養(yǎng)24±3小時，不要震蕩培養(yǎng)；

3、使用接種環(huán)接種到李斯特菌顯色瓊脂以及二次選擇性培養(yǎng)基（比如PALCAM CM0877&SR0150）中。37℃培養(yǎng)24±3小時（PALCAM瓊脂應(yīng)該在微需氧條件下培養(yǎng)才能獲得最好結(jié)果）；

4、檢查PALCAM瓊脂上的黑色菌落，或者李斯特菌顯色瓊脂上的沒有外環(huán)的藍色菌落；

5、將同樣的0.1ml的Half Fraser Broth接種到10ml的Fraser Broth CM0895 & SR0156中，37℃培養(yǎng)48±3小時，然后重復(fù)第3、4步，接下來做第6步；

6、參考ISO 11290-1:1997 使用正確的方法確認平板上的可疑菌落為單增李斯特菌或李斯特菌屬。