細(xì)胞培養(yǎng)是生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)，做過細(xì)胞培養(yǎng)的小伙伴都知道培養(yǎng)過程中的常用到的生物試劑的作用嗎？小編大概歸納了一下在細(xì)胞培養(yǎng)過程中常見試劑的作用，以便更好地了解細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。

一、了解培養(yǎng)基

雖然細(xì)胞系培養(yǎng)沒有固定的培養(yǎng)基，但針對不同特性的細(xì)胞所選擇的培養(yǎng)基也會有所不相同，比如貼壁培養(yǎng)選擇MEM培養(yǎng)基會具有較好的貼壁效果；懸浮細(xì)胞一般采用RPMI-1640培養(yǎng)基生長狀態(tài)旺盛；無血清培養(yǎng)的細(xì)胞一般會選擇AIM V （12005）或SFM培養(yǎng)基。

根據(jù)細(xì)胞特性在培養(yǎng)基生產(chǎn)過程中常會添加一些特殊成分： 

1.  L-谷氨酰胺

 L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)過程中主要為細(xì)胞提供能量來源，并且會參與到細(xì)胞的核酸代謝及蛋白質(zhì)合成，它的缺陷在于降解時會釋放氨基，對細(xì)胞會造成一定的毒性傷害。所以一些致敏細(xì)胞培養(yǎng)時需要注意谷氨酸鈉及氨成分的含量。

2. GlutaMAX-Ⅰ

GlutaMAX-I 二肽屬于谷氨酰胺的衍生品，其作用機(jī)理基本上與L-谷氨酰胺相一致，不同的是GlutaMAX-I 的結(jié)構(gòu)比較穩(wěn)定，降解度低，所以釋放的氨基毒性物質(zhì)也較少，適用于無毒性的供應(yīng)能量需求。

 3.酚紅指示劑

酚紅作為一種化學(xué)指示劑，常用被于酸堿度PH 值的辨識。它在酸性環(huán)境下呈現(xiàn)顯色為黃色，中型溶液時呈現(xiàn)紅色，偏堿性環(huán)境時顯示顏色為紫色。正常情況下，酚紅作為指示劑，在細(xì)胞培養(yǎng)過程中一般不與培養(yǎng)物發(fā)生反應(yīng)，但是對于哺乳動物動物細(xì)胞培養(yǎng)時，會起到類固醇激素的細(xì)胞反應(yīng)，并且在細(xì)胞檢測時也會對檢測數(shù)據(jù)起到干擾作用。因此，一般在培養(yǎng)哺乳動物和打算做流式細(xì)胞檢測時一般不用含酚紅的培養(yǎng)基。

二．細(xì)胞培養(yǎng)、檢測過程中的試劑

1.臺盼藍(lán)染色與活細(xì)胞計(jì)數(shù)

普通細(xì)胞計(jì)數(shù)的方法將細(xì)胞懸浮液用無血清培養(yǎng)基稀釋后，加入一定比例的臺盼蘭染色液，輕搖混勻后，用血球計(jì)數(shù)板/細(xì)胞計(jì)數(shù)板中進(jìn)行人工或機(jī)器計(jì)數(shù)操作。其中未染色的細(xì)胞為活細(xì)胞，染為藍(lán)色的細(xì)胞為死細(xì)胞。

2.抗生素的使用

為防止下的培養(yǎng)污染在有些細(xì)胞培養(yǎng)過程中也會適量添加抗生素或康霉菌素，由于這些添加劑雖能起到抑菌作用但會影響到細(xì)胞的正常生長和傳代，甚至出現(xiàn)毒殺細(xì)胞的作用。所以，添加時一定要進(jìn)行細(xì)胞毒性測試并注意使用濃度。

3.丙酮酸鈉的添加

丙酮酸鈉在細(xì)胞培養(yǎng)過程中一般會作為葡萄糖的替代品為細(xì)胞生長提供充足的碳源，可根據(jù)細(xì)胞生長狀況添加，有的也會配備好添加在培養(yǎng)基中。

4.平衡鹽溶液、緩沖液的使用

細(xì)胞培養(yǎng)中常見的平衡鹽主要有HBS、EBS和Eagles液。

不同緩沖液的碳酸氫鈉的水平也不一致，并且緩沖液的PH也會根據(jù)培養(yǎng)產(chǎn)物及培養(yǎng)溫度的不同而產(chǎn)生相應(yīng)的變化，可根據(jù)實(shí)際情況選擇使用。

5.培養(yǎng)血清的選擇

細(xì)胞的培養(yǎng)與血清的選擇也具有較大關(guān)系。一般胎牛血清由于成本昂貴一般被用于對生長環(huán)境挑剔的難以生長的細(xì)胞，比如干細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等。普通的肌細(xì)胞、白細(xì)胞等選擇普通的新生牛血清即可。

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