FLUO-EV是穩(wěn)定表達熒光蛋白EGFP（綠色）和mCherry（紅色）與四泛蛋白CD63和CD9融合蛋白的胞外囊泡。FLUO-EV 是通過切向流過濾（TFF）和尺寸排阻色譜法（SEC）從基因工程細胞中純化出來的，以共同表達 CD63-EGFP 和 CD9-mCherry。FLUO-EVs 顯示出熒光團的高穩(wěn)定性，可用于體外跟蹤研究，或作為納米顆粒分析儀的參考材料，或用于檢測校準。

細胞外囊泡（EVs）是一種脂質(zhì)膜結(jié)合的顆粒，通過傳遞生理過程所必需的調(diào)節(jié)分子參與細胞間的交流。由于細胞外囊泡能有效載運特定的貨物分子，因此被認為是治療藥物的合適載體。藥物可以通過主動的外源策略或?qū)Ξa(chǎn)生囊泡的細胞進行基因修飾來裝載到 EVs 中。為了生產(chǎn)輸送治療蛋白的EVs，我們對HEK293和腫瘤細胞進行了基因改造和比較。在 HEK293 中，基于四聚碳酸酯的 RFP 融合蛋白更加穩(wěn)定，并優(yōu)先分選到 EV 中。從轉(zhuǎn)基因 HEK293 細胞介質(zhì)中分離出的 EV 被癌細胞捕獲，有效地運送了它們的貨物。在 CD9/CD81 和 RFP 之間引入的 Cathepsin B 裂解位點被腫瘤特異性蛋白酶識別，使報告蛋白得以釋放。我們的研究結(jié)果表明，HEK293 細胞是產(chǎn)生 EVs 的系統(tǒng)，為開發(fā)納米平臺向腫瘤細胞高效遞送治療蛋白和原藥鋪平了道路。