ELISA酶聯(lián)免疫反應(yīng)實(shí)驗(yàn)檢測服務(wù)簡介

ELISA是指以酶作為標(biāo)記物、以抗原和抗體之間免疫結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)的固相吸附測定方法。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時(shí)，受檢標(biāo)本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測定方法達(dá)到很高的敏感度。

按試劑盒說明書進(jìn)行操作，不同指標(biāo)操作不一樣。具體以訂購的試劑盒說明書為準(zhǔn)。基本步驟如下：

　　1.包被：用碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1-10μg/ml。在聚苯乙烯酶標(biāo)板的每孔加100μl，4℃過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3min。(一般商品化的試劑盒中已包被好抗體，此步驟可省略)

　　2.封閉：每孔加入200ul封閉液，37℃或室溫孵育1-2 h。

　　3.洗滌：小心揭掉封板膜，放入洗板機(jī)，洗滌3-5遍。也可以手動(dòng)洗板：棄去液體，每孔加入300ul洗液，浸泡1-2min，在吸水紙上拍干，重復(fù)3-5遍。(一般商品化的試劑盒中已包被好抗體，前三個(gè)步驟可省略)

　　4.加樣：加適當(dāng)稀釋的待檢樣品100μl于上述已包被的反應(yīng)孔中。(同時(shí)做空白孔，倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品孔，有條件可加做陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔作為質(zhì)控點(diǎn))。

　　5.溫育：用封板膜封板后置37℃孵育1-2 h。

　　6.洗滌：同步驟3。

　　7.加抗體：于各孔中加稀釋好的生物素化抗體工作液100 μl。

　　8.溫育：用封板膜封板后置37℃孵育1 h。

　　9.洗滌：同步驟3。

　　10.加酶結(jié)合物：于各孔中加稀釋好的酶結(jié)合物工作液100 μl。

　　11.溫育：用封板膜封板后置37℃避光孵育30 min。

　　12.洗滌：同步驟3。

　　13.加顯色底物：于各孔中加入TMB底物溶液100 μl，37℃避光反應(yīng)10～30min，直到倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品孔出現(xiàn)明顯的顏色梯度為止。

　　14.終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸100 μl，顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色。

　　15.結(jié)果測定：10min內(nèi)，在酶標(biāo)儀上，于450nm處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測各孔OD值。

ELISA酶聯(lián)免疫反應(yīng)實(shí)驗(yàn)檢測服務(wù)內(nèi)容

客戶須知 
ELISA試劑盒自備（建議定購*試劑盒，也可委托我們代購）。

實(shí)驗(yàn)周期

7個(gè)工作日內(nèi)（具體實(shí)驗(yàn)周期視實(shí)驗(yàn)方案而異）

服務(wù)承諾

提供實(shí)驗(yàn)方法、步驟、所用試劑、儀器及相關(guān)分析數(shù)據(jù)。