I型膠原，鼠尾 現(xiàn)貨
用于細(xì)胞培養(yǎng)的高質(zhì)量I型鼠尾膠原蛋白溶液（例如3D凝膠，支架和涂層）
提供體內(nèi)樣細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）結(jié)構(gòu)
非胃蛋白酶化的天然膠原蛋白，用于在凝膠基質(zhì)中模擬生物ECM
快速聚合有助于在3D凝膠中實現(xiàn)的細(xì)胞分布

I型膠原，鼠尾 現(xiàn)貨

I型膠原，鼠尾 現(xiàn)貨

應(yīng)用范圍：

• 體內(nèi)樣基質(zhì)中的3D細(xì)胞培養(yǎng)
• 在3D環(huán)境中進行活細(xì)胞成像
• 為類動物體和球體創(chuàng)建3D支架
• 使用µ-Slide Chemotaxis在3D膠原蛋白凝膠中進行趨化性測定
• 懸浮細(xì)胞（例如白細(xì)胞）的細(xì)胞遷移測定
• 用薄膠原蛋白層覆蓋細(xì)胞培養(yǎng)容器以促進細(xì)胞附著
• 2D與3D環(huán)境中的細(xì)胞分化研究
• 低自發(fā)熒光，非常適合熒光顯微鏡

技術(shù)特點：

• 來自大鼠肌腱的高質(zhì)量純化蛋白
• 高度標(biāo)準(zhǔn)化的制造流程和嚴(yán)格的質(zhì)量控制
• 溫和的制造工藝可實現(xiàn)的誕生率
• 提供詳細(xì)的協(xié)議，易于處理
• 在–20°C的溫度下運輸和存儲，以提供明確的質(zhì)量和可重復(fù)性
• 提供2種濃度：標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用為5 mg / ml，特殊應(yīng)用為10 mg / ml的高濃度溶液
• 市場上的自然交聯(lián)（質(zhì)量等級）
• 高粘度：推薦用于高粘度溶液的移液器
• 低自發(fā)熒光

規(guī)格：

原始資料	大鼠尾肌腱
出現(xiàn)	光學(xué)透明粘稠液體
萃取	非胃蛋白酶酸
純度	通過SDS PAGE> 90％
不育性	無菌，用于細(xì)胞培養(yǎng)
質(zhì)量	經(jīng)測試發(fā)現(xiàn)DNA，細(xì)菌，真菌和支原體呈陰性
生長因子	沒有
公式	提供17.5 mM乙酸（0.1％）
pH值	3.8
功能控制	細(xì)胞培養(yǎng)中的3D凝膠化和2D涂層測試
存儲	–20°C，避免多次冷凍和解凍循環(huán)

注意：我們建議將5 mg / ml的膠原蛋白溶液用于3D凝膠和培養(yǎng)皿的薄涂層。由于其高濃度（和高粘度），10 mg / ml膠原蛋白溶液特別適用于特殊應(yīng)用，例如支架和生物打印。
請注意，該產(chǎn)品僅供研究使用。如果您對GMP級膠原蛋白感興趣，請通過以下方式與我們聯(lián)系：license@ibidi.de

使用膠原蛋白作為體內(nèi) 3D細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)

膠原蛋白是結(jié)締組織的主要成分，在哺乳動物體內(nèi)含量豐富。它廣泛用于3D細(xì)胞培養(yǎng)中以模擬生物細(xì)胞外基質(zhì)，或用作促進細(xì)胞附著的涂層。

許多細(xì)胞自然地在三維環(huán)境中生長。在體外培養(yǎng)時，細(xì)胞附著在平坦的2D表面上，其行為可能與在3D凝膠基質(zhì)中時不同。在許多情況下，3D環(huán)境與體內(nèi)情況非常相似，在計劃細(xì)胞培養(yǎng)測定時應(yīng)考慮到這種情況。

附著在2D表面上的HT-1080癌細(xì)胞的顯微鏡和示意圖（左），并嵌入到3D I型膠原大鼠尾巴基質(zhì)中（右）。

膠原蛋白結(jié)構(gòu)

膠原蛋白是由三個α鏈組成的纖維蛋白。它們結(jié)合形成繩狀的三重螺旋，從而為細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）提供拉伸強度。α鏈包含GXY重復(fù)序列，其中包括甘氨酸（G），該氨基酸非常適合三螺旋。通常，X和Y代表羥脯氨酸和脯氨酸，它們是膠原蛋白穩(wěn)定性的關(guān)鍵成分。三重螺旋以自組織的方式聚集并形成原纖維。在體內(nèi)，原纖維聚合成纖維形成組織，例如肌腱或真皮。

用于體外實驗的膠原蛋白是從動物組織中酸提取或酶提取的。在酸性條件下（低pH），纖維分解成可溶性原纖維。在某些提取方法中，胃蛋白酶被用來促進膠原蛋白的提取。然而，胃蛋白酶也一定程度地消化膠原蛋白，這導(dǎo)致天然纖維交聯(lián)活性顯著降低。

與胃蛋白酶提取的膠原蛋白（通常來自牛皮膚）不同，ibidi I型??膠原蛋白的大鼠尾巴是酸性提取的。這以及非常溫和的制造過程可以保持大的誕生率。

膠原蛋白的結(jié)構(gòu)

膠原蛋白聚合

在酸性溶液中，膠原原纖維以未定向的方式存在。膠原原纖維之間僅形成氫鍵，從而使溶液具有高粘度。更改為中性pH會使原纖維聚合成纖維。該聚合產(chǎn)生三維膠原蛋白凝膠。所用膠原蛋白的誕生水平?jīng)Q定了膠原蛋白網(wǎng)絡(luò)中纖維交聯(lián)的水平。天然（非胃蛋白酶提取的）膠原蛋白表現(xiàn)出高水平的交聯(lián)，而胃蛋白酶化的膠原蛋白溶液形成的體內(nèi)樣凝膠較少。

ibidi I型??膠原蛋白大鼠尾巴由于蛋白質(zhì)濃度高而具有很高的粘度，尤其是在10 mg / ml時。pH驅(qū)動的聚合如下改變其特性：

	非聚合膠原	聚合膠原
宏觀光學(xué)外觀	透明至微乳白色	白色，渾濁
顯微光學(xué)外觀	清晰，無結(jié)構(gòu)	原纖維網(wǎng)絡(luò)，建立在顯微鏡下可見的纖維
黏度	很高，但仍在流動	不流動 小變形（例如，用移液器吸頭造成的）會破壞結(jié)構(gòu)
移液	可以用特殊的移液器吸取 高粘度液體	不能進行規(guī)定的移液，任何機械力都會破壞結(jié)構(gòu)和機械性能

進一步閱讀：

分子細(xì)胞生物學(xué)，James Darnell等。書號0-7167-2380-8

Wolf K等。（2013）細(xì)胞遷移的物理極限：通過ECM空間和核變形控制以及通過蛋白水解和牽引力進行調(diào)節(jié)。J細(xì)胞生物學(xué) 201（7）：1069–84。10.1083 / jcb.201210152。
閱讀摘要

應(yīng)用實例

在膠原蛋白基質(zhì)中遷移HT-1080癌細(xì)胞的3D活細(xì)胞成像

將表達LifeAct的HT-1080細(xì)胞（綠色）接種在µ-Slide趨化性中的1.5 mg / ml I型膠原蛋白大鼠尾巴層（白色）中。通過使用水浸物鏡40x / 1.2在Zeiss共聚焦顯微鏡LSM 880 AxioObserver上每300秒拍攝一張照片來記錄細(xì)胞遷移。

3D膠原I凝膠對FCS梯度的內(nèi)皮細(xì)胞趨化性

將人類臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）的活細(xì)胞成像嵌入在1.5μg/ ml I型膠原趨化性凝膠中，并向胎牛血清遷移。注意：在趨化過程中，相互連接的單元格形成字符串。相襯，4倍物鏡，24小時。

HT-1080癌細(xì)胞在3D膠原蛋白凝膠中的侵襲

將侵襲性人纖維肉瘤癌球（HT-1080）嵌入I型膠原大鼠尾凝膠中。在µ-Slide 8孔中記錄了48個小時對凝膠基質(zhì)的浸潤。4倍物鏡，明場。

在3D膠原蛋白凝膠中發(fā)芽內(nèi)皮細(xì)胞

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）球狀體的活細(xì)胞成像，該活體成像嵌入由I型膠原（大鼠尾巴）制成的3D凝膠中。根據(jù)應(yīng)用說明26“制造I型膠原蛋白”，用*內(nèi)皮細(xì)胞生長培養(yǎng)基（PromoCell）制成的大鼠尾I型膠原蛋白凝膠（1 mg / ml）。將VEGF-165（50 ng / ml）添加到培養(yǎng)基中以誘導(dǎo)出芽活性。

在µ-Slide 8孔中記錄了44個小時的凝膠基質(zhì)發(fā)芽過程。10倍和4倍物鏡，明場。 

 注：楊清辰發(fā)布