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產(chǎn)品說(shuō)明
CSPP多重PCR檢測(cè)試劑盒可同時(shí)檢測(cè)空腸彎曲菌(C. jejuni)，結(jié)腸彎曲菌(C. coli)，海鷗彎曲菌(C. lari)，烏普薩拉彎曲菌(C. upsaliensis)，和胎兒彎曲菌胚胎亞種(C. fetus subsp. fetus)等5種常見(jiàn)的彎曲菌屬致病細(xì)菌。
產(chǎn)品組成 （50次，20 µL PCR）
組分 | 數(shù)量 | 體積 |
Master Mix （2X） * | 1管 | 500 µL |
Primer Mix | 1管 | 200 µL |
陽(yáng)性對(duì)照 | 1管 | 50 µL |
H2O | 1管 | 1 mL |
* Master Mix （2X）含有Taq DNA聚合酶， dNTP，含MgCl2的PCR優(yōu)化反應(yīng)緩沖液，以及電泳時(shí)所必需的色素試劑。使用頻率高時(shí)一旦融解請(qǐng)于4oC保存或分裝保存。
儲(chǔ)存條件
-20oC長(zhǎng)期保存。多次反復(fù)凍融會(huì)降低檢測(cè)效率。
使用說(shuō)明
- DNA樣本處理、反應(yīng)體系配制、核酸擴(kuò)增和結(jié)果鑒定等各步驟應(yīng)分域進(jìn)行，以避免交叉污染。
- 細(xì)菌基因組DNA可使用市售試劑盒提取，也可按以下方法快速制備：
- 從平板上挑取適量菌落，加入含有200 µL ddH2O的滅菌離心管中，渦旋震蕩混勻，肉眼可見(jiàn)菌液渾濁即可。
- 菌液煮沸10 min，冷卻至室溫后，13,000 rpm離心2 min。
- 將上清移至新離心管中，即得可用于本試劑盒檢測(cè)的細(xì)菌DNA模板。
- PCR反應(yīng)液配制：
2 X Master Mix 10 µL
Primer Mix 4 µL
陽(yáng)性對(duì)照/樣品DNA 2 µL
H2O 4 µL
反應(yīng)終體積 20 µL
- PCR反應(yīng)條件：
95oC 預(yù)變性 6 min
95 oC 變性 30 sec
30個(gè)循環(huán) 59 oC 復(fù)性 30 sec
72 oC 延伸 30 sec
72 oC 延伸 7 min
- 瓊脂糖凝膠（2%）電泳檢測(cè)15 µL PCR擴(kuò)增產(chǎn)物 (100 V，50 min)。5種彎曲菌屬細(xì)菌的檢測(cè)結(jié)果如下圖所示，其中23S rRNA作為擴(kuò)增反應(yīng)的內(nèi)參照，在所檢測(cè)的5種彎曲菌屬細(xì)菌均應(yīng)可見(jiàn)其大小為650 bp的擴(kuò)增片段。陽(yáng)性對(duì)照應(yīng)可見(jiàn)6條大小不同的擴(kuò)增片段。
- 注意事項(xiàng)：
試劑使用前建議短暫離心后開(kāi)啟。
PCR反應(yīng)液請(qǐng)?jiān)诒信渲?，以增?qiáng)檢測(cè)的特異性。
本試劑盒中Master Mix包含電泳所必需的試劑，PCR反應(yīng)后可直接電泳。
