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調(diào)整方法:將波長度盤對準529nm,從光路取出譜釹濾光片,光路空缺時調(diào)電表指針到100%T,再將譜釹濾光片插進光路。打開儀器左側(cè)小蓋板,找到波長校正螺絲(3個中左側(cè)柄長的一個);反時針方向微微調(diào)節(jié)(負誤差時順時針方向),使電表指針的指示T%為低。反復(fù)檢查波長誤差情況,直到符合儀器技術(shù)指標為止。蓋好左側(cè)小蓋板,校正結(jié)束。
有些儀器,可使用氫燈或置譜釹濾光片于測定比色槽內(nèi),編進濾工掃描程序后,儀器即可自動地在一定波長范圍內(nèi)進行波長校正。分光光度儀的光學系統(tǒng)密封在一個單元組件內(nèi),若發(fā)生故障,波長不準,常須請制造商派專人修理。其它尚有譜線校正法、干涉濾光片校正法和有色溶液校正法等,可參考有關(guān)資料。
(2)線性檢查:線性檢查包括儀器線性及測定方法線性兩個方面的檢查。線性誤差表現(xiàn)為溶液的濃度與吸光度不成線性關(guān)系,出現(xiàn)正偏離或負偏離的現(xiàn)象。這種偏離,按比耳定律的現(xiàn)象來自兩個方面:一是溶液本身不符合比耳定律,這種現(xiàn)象叫做化學偏離;二是儀器本身各種因素的影響,使吸光度測定值與濃度之間不成線性關(guān)系,這種現(xiàn)象叫儀器偏離。此處研究的是后者。儀器偏離的因素很多,如雜光、有限帶寬、檢測器噪聲、環(huán)境條件變化、波長的變動、比色杯的誤差、輻射光的非平行性、檢測器本身的非線性等。
儀器線性檢查常用一種在一定波長及一定濃度范圍內(nèi)確知其服從比耳定律的有色物質(zhì),配成不同濃度的溶液,來檢查儀器本身是否能如實地反映有色物質(zhì)的濃度變化。這種檢查方法與任何被測物質(zhì)呈色反應(yīng)等方法學上的題目無關(guān)。用測得的吸光度對濃度作圖,在理想情況下應(yīng)是一條直線。常用的方法是用0.8、1.6、2.4、4.0mg/L伊文藍濃度系列來檢查,波長用610nm。
(3)雜光(散光)檢查:在吸光度測定中,凡檢測器感受到的不需要的輻射都稱為雜光。雜光對吸光度測定法的正確性有嚴重的影響,但卻往往被忽視。雜光的來源有:①儀器本身的原因,如單色器的設(shè)計、光源的光譜分布、光學原件的老化程度、波帶寬度以及儀器內(nèi)部的反射及散射等;②室內(nèi)光線過強而漏進儀器,儀器暗室蓋不嚴;③樣品本身的原因,如樣品有無熒光、樣品的散射能力強弱等。
雜光檢測方法:①紫外光區(qū)的雜光監(jiān)測可用10±0.1g/L的碘化納溶液,在240nm處測定的吸光度應(yīng)大于2.00。此外,也可用12g/L的氯*鉀溶液,在220nm處測其透光度,即為雜光量,一般應(yīng)小于1%T。以上測定均用石英杯,以蒸餾水校零。②在可見光區(qū)可使用譜釹濾光片或硫酸鎳法檢查。先用譜釹濾片校正波長,然后用黑紙片擋住比色杯光路(進口儀器帶有比色杯樣玄色標柱)之后調(diào)整0%T,再用空氣做空缺調(diào)100%T。插進譜釹濾光片,在585nm處測定,其測定值即為雜光水平。
(4)比色杯的質(zhì)量檢查:比色杯一般由玻璃、石英或熒石制成,光徑1.0或0.5cm,光線通過期有一部分光為空氣與玻璃接觸面的反射而損失(4%),另一部分(很少)為玻璃吸收。比色杯的質(zhì)量除其原料外,再就是玻璃的厚度均勻,上下一致,各杯彼此相配。廠家多以四個一套供給,且杯口上部外面標有箭頭,箭頭對光源側(cè)使用。盡管如此,在使用前還是應(yīng)作質(zhì)量檢查。常用伊文藍法:將一定量的2.0mg/L的伊文藍溶液注進比色杯中,比色杯內(nèi)液面應(yīng)相等。用一個比色杯作標準,用紅色濾光片(波長600~610nm),用水校零后將此杯的讀數(shù)正確調(diào)至50%T,接著讀取其余杯的透光度。透光度相差在±0.5%T范圍內(nèi)者為合格。
(5)穩(wěn)定性檢查:檢查方法:將分光光度計及附件接于0.5kVA以上的可調(diào)變壓器,先調(diào)電壓為220V,波長固定在650nm,在光路比色杯裝以空缺液,調(diào)讀數(shù)為90%T處,再將電壓升至230V及降至190V,觀察透光度的漂移值。若介于88.5%~91.5%T之間為合格。在電源電壓不變的條件下,在3分鐘內(nèi)其讀數(shù)漂移不應(yīng)超過標尺上限值的±0.5%。
(6)重復(fù)性檢查:在波長、工作狀態(tài)、電源電壓、比色杯配套等合格的條件下,進行重復(fù)檢查。在用交流電源供電時,儀器對一種溶液重復(fù)測定的讀數(shù)值差應(yīng)小于或即是標尺上限值的1%。試驗方法:將分析純重絡(luò)酸鉀于120~150攝氏度烘干2小時,干燥器中冷卻。精稱509.1mg于1000ml容量瓶中,以蒸餾水溶解并加至刻度,混勻(此液180mg/L鉻)。就用液為30、60、180mg鉻/L。取波長440nm,將應(yīng)用液各濃度管連續(xù)測3~5次,各濃度管中大誤差小于1%T為合格。
(7)靈敏度檢查:將重鉻酸鉀液配制成30和32.5mg鉻/L及120和122.5mg/L鉻的4種應(yīng)用液(濃度差兩組各為2.5mg/L鉻)。波長440nm,以水校零點,將上述應(yīng)用液連續(xù)測3次吸光度,兩組2.5mg/L鉻濃度差的吸光度值差都不小于0.01為合格。
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