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光學(xué)相干斷層掃描(OCT)是一種強(qiáng)大的工具，提供無創(chuàng)的組織學(xué)成像。然而，與其他光學(xué)顯微鏡工具一樣，需要高數(shù)值孔徑(N.A.)透鏡來產(chǎn)生緊密聚焦，從而產(chǎn)生窄景深，這就需要?jiǎng)討B(tài)聚焦并限制成像速度。為了克服這一限制，我們開發(fā)了一種產(chǎn)生多軸向焦點(diǎn)的超表面平臺(tái)，通過提供多個(gè)焦平面來提高體積OCT成像速度。該平臺(tái)對(duì)產(chǎn)生的軸向焦點(diǎn)的數(shù)量、位置和強(qiáng)度提供準(zhǔn)確和靈活的控制。直徑為8毫米的全玻璃超表面光學(xué)元件由熔融硅片制成，并應(yīng)用于我們的掃描OCT系統(tǒng)中。在所有深度的恒定橫向分辨率為1.1 μm，多焦點(diǎn)OCT將皮膚學(xué)成像的體積采集速度提高了三倍，同時(shí)仍然清晰地顯示角質(zhì)層、表皮細(xì)胞和真皮-表皮連接的特征，并提供形態(tài)學(xué)信息作為基底細(xì)胞癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)。在稀疏的樣品中，成像速度可以進(jìn)一步提高，例如7倍的7焦光束?？傊?，這項(xiàng)工作證明了基于超表面的多焦點(diǎn)OCT用于快速虛擬活檢的概念，進(jìn)一步為開發(fā)具有高分辨率和緊湊體積的快速體積成像系統(tǒng)提供了見解。

目前生物學(xué)成像中超表面光學(xué)的孔徑相對(duì)較小(通常直徑為幾百微米)，導(dǎo)致焦距(或工作距離)短，視場(chǎng)(FOV)小，與掃描儀不兼容，并且無法處理大直徑激光束(例如，直徑為毫米)。這項(xiàng)工作旨在解決這些問題。研究者制作了直徑為8mm的全玻璃超表面光學(xué)元件，并將這些平面光學(xué)元件集成到掃描OCT系統(tǒng)中。我們選擇了全二氧化硅設(shè)計(jì)來簡化制造過程，并選擇熔融二氧化硅，因?yàn)樗谧贤獾郊t外光譜上具有出色的透射性。由于超透鏡具有嚴(yán)重的色散，特別是在大直徑和毫米級(jí)焦距的情況下，在這項(xiàng)工作中繞過多焦超透鏡，而是使用由超表面多焦產(chǎn)生器和消色差物鏡組成的混合透鏡。實(shí)驗(yàn)證明，混合設(shè)計(jì)是一種實(shí)用可靠的解決方案。

具有多焦點(diǎn)超表面的混合透鏡設(shè)計(jì)

為了在軸向上產(chǎn)生多個(gè)焦點(diǎn)，超表面相位表示為PMeta (x , y) ={[PLens (x , y , f m ) PLens (x , y , f )] × Am (x , y)}。式中(x,y)為平面坐標(biāo)，M為焦數(shù)，f M為目標(biāo)焦位置，fo為物鏡與多焦超表面配合的焦距，P Lens = 2 n[f 2 (x 2 + y 2) f]/為透鏡相位輪廓，λ為光波長，n為周圍環(huán)境的衍射指數(shù)，Am (x,y)為二元矩陣，作為分配器將超表面像素隨機(jī)分配到不同焦點(diǎn)圖1b中多焦超表面與物鏡的組合給出了M [PLens (x, y, f) × Am (x, y)]的相位調(diào)制。在各焦之間均勻分配，且焦強(qiáng)度與焦數(shù)的平方成反比。我們制作了四個(gè)與圖1b中四個(gè)多焦光束對(duì)應(yīng)的多焦超表面，并在OCT系統(tǒng)中進(jìn)行了測(cè)試。在多焦超表面的幫助下，OCT可以產(chǎn)生兩個(gè)、三個(gè)甚至七個(gè)焦平面，圖1c中0.8 μm聚苯乙烯(PS)珠的OCT b掃描(XZ平面)實(shí)驗(yàn)證明了這一點(diǎn)。

光學(xué)相干斷層掃描中多焦點(diǎn)光束

由于OCT皮膚成像的樣品通常是致密的，具有很強(qiáng)的光吸收，因此作者有意限制焦點(diǎn)的數(shù)量，以實(shí)現(xiàn)每個(gè)焦點(diǎn)的更高功率。選擇三個(gè)多病灶的OCT成像光束:兩個(gè)焦點(diǎn)梁1 (2 foci-1)的軸向間隔40μm 超表面像素同樣分配給這兩個(gè)焦點(diǎn)(R - 1 = 50%, R2 = 50%),這兩個(gè)焦點(diǎn)梁2 (2 foci-2)有一個(gè)相同的間隔40μm和不同像素比率(1 = 45%,R 2 = 55%),和三個(gè)焦點(diǎn)梁(3Foci)同樣有40μm間隔與比率R 1 = 27%, R 2 = 33%, R 3 = 40%。使用圖S1b所示的工具在OCT光源(910 - 100 nm)下測(cè)量三束光束的輪廓。從XZ曲線可以看出，三束多焦光束的焦點(diǎn)位置與設(shè)計(jì)一致。圖3b顯示了光束在五個(gè)深度的橫截面輪廓，表明每個(gè)焦點(diǎn)都有一個(gè)圓形的高斯輪廓。正態(tài)高斯光束和三種多焦光束的軸向強(qiáng)度分布。2Foci-1的兩焦強(qiáng)度比為50:50,2Foci-2的強(qiáng)度比為46:54,3Foci的強(qiáng)度比為25:36:39。實(shí)驗(yàn)值與設(shè)計(jì)值一致，證明了方法的準(zhǔn)確性。圖3d比較了多焦點(diǎn)光束和聚焦高斯光束的光束直徑。所有焦的直徑為1.0 ~ 1.1 μm, DOF為6 μm。在圖3和之后的圖4中，將40物鏡的焦點(diǎn)位置設(shè)為Z = 0。2Foci和3Foci光束的焦距分別為4.5 mm 20 μm和4.5 mm + (40 μm, 0 μm, 40 μm)。

高斯光束、雙焦光束(2Foci-1和2Foci-2)和三焦光束(3Foci)對(duì)0.8 μm PS微珠的體積成像

在OCT系統(tǒng)中，使用0.8 μm PS微珠對(duì)高斯光束和三個(gè)多焦光束進(jìn)行了表征。珠子沿深度方向的最大強(qiáng)度投影表明，高斯光束只能在視場(chǎng)(FOV)中珠子數(shù)量相對(duì)較少的薄深度層中獲得清晰的珠子輪廓。相比之下，2Foci-1和2Foci-2光束可以清楚地從兩個(gè)焦平面上分辨出珠子，在相同的數(shù)據(jù)采集過程中提供更多有用的信息。同樣，3Foci光束可以顯示最多的珠子，因?yàn)樗刂齻€(gè)焦平面捕獲數(shù)據(jù)。圖4b給出了五個(gè)深度的xyplane。高斯光束在Z = 0處能清晰地分辨出微珠，而在非聚焦深度處，微珠輪廓明顯擴(kuò)大。兩焦光束在Z = 20和20 μm處具有較好的分辨能力，三焦光束在Z = 40 μm、0和40 μm處具有較好的分辨能力。更多的頭部幻像成像細(xì)節(jié)見圖S4和圖7。四束光束的軸向強(qiáng)度從頭模體體積測(cè)量，并繪制在圖中。如前所述，多焦點(diǎn)光束M表示為M = 1 [F(x, y, F M) Rm]，強(qiáng)度為高吸光樣品中深層區(qū)域的增強(qiáng)信噪比。

OCT快速高分辨率細(xì)胞成像

目前，細(xì)胞分辨率成像是通過高數(shù)值鏡頭實(shí)現(xiàn)的，并且受限于鏡頭的短DOF。使用40X物鏡對(duì)74歲男性鼻側(cè)壁正常皮膚進(jìn)行OCT成像。焦平面位于皮膚表面(Z = 0)，角質(zhì)層的特征清晰可見，表皮區(qū)域的圖像過于模糊而無法區(qū)分，如Z = 40和80 μm的XY平面所示。在雙焦光束(2Foci-2)下，b掃描生成兩個(gè)焦平面，并精確描繪出Z = 0處角質(zhì)層和Z = 40 μm處表皮細(xì)胞的輪廓。利用三焦光束(3Foci)的OCT系統(tǒng)可以同時(shí)在三個(gè)焦平面上可靠地獲取細(xì)胞分辨率圖像。在Z = 0, Z = 40 μm和Z = 80 μm的離散深度上，細(xì)胞很容易被分解。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在相同的參數(shù)下，多焦光束可以從多個(gè)平面上收集非常詳細(xì)的圖像數(shù)據(jù)，收集的體積是高斯光束的2- 3倍。為了高分辨率的體積成像，動(dòng)態(tài)聚焦被利用。焦平面軸向平移掃描連續(xù)逐級(jí)深度。每次平移后，對(duì)樣品再次進(jìn)行體積成像，僅提取DOF內(nèi)的層進(jìn)行存儲(chǔ)。最后，對(duì)所有存儲(chǔ)層進(jìn)行數(shù)字重建，形成完整的高分辨率三維圖像。理論上，軸向運(yùn)動(dòng)的數(shù)量(z堆)與光束的焦點(diǎn)數(shù)量成反比。理論上，與高斯光束相比，雙焦點(diǎn)或三焦點(diǎn)超表面光束只需要一半或三分之一的z堆棧數(shù)量，從而允許更快的細(xì)胞分辨率皮膚成像。

75歲男性鼻部基底細(xì)胞癌(BCC)的OCT影像

圖像通過三焦(3Foci)光束捕獲。與之前所示的正常皮膚樣本相比，BCC樣本顯示角質(zhì)層較厚，腫瘤角化細(xì)胞細(xì)胞與周圍基質(zhì)之間界限不清。角質(zhì)層呈不規(guī)則的蜂窩狀，可見單個(gè)明亮的腫瘤島(藍(lán)色星號(hào))，周圍是深色的瘤周裂隙(白色箭頭)。圖7d顯示明顯的腫瘤角質(zhì)形成細(xì)胞擁擠在一起，沒有中間的基質(zhì)細(xì)胞(黑色星號(hào))。這些發(fā)現(xiàn)與使用高分辨率反射共聚焦顯微鏡(RCM)觀察皮膚癌時(shí)所觀察到的BCC特征一致。在RCM中，上述異常形態(tài)信息可作為BCC的診斷標(biāo)準(zhǔn)。

在這項(xiàng)工作中，研究團(tuán)隊(duì)展示了基于超表面的多焦點(diǎn)OCT應(yīng)用于快速組織樣成像(虛擬活檢)的概念。多焦點(diǎn)OCT可以將高質(zhì)量細(xì)胞分辨率皮膚成像的體積采集速度提高三倍，而不會(huì)降低空間分辨率?？臻g樣品允許更大的成像速度提高，例如，七焦光束的7倍改進(jìn)。提出的多焦點(diǎn)相位模型利用隨機(jī)空間復(fù)用，可以靈活準(zhǔn)確地控制焦點(diǎn)的數(shù)量、位置和獨(dú)立焦點(diǎn)的強(qiáng)度。研究團(tuán)隊(duì)開發(fā)了一種大型(例如，直徑8毫米)全玻璃超表面光學(xué)元件與熔融硅晶圓的制造工藝。在未來的工作中，我們將開發(fā)消色差多焦超透鏡，以實(shí)現(xiàn)OCT探頭的小型化，從而顯著增加應(yīng)用。在這項(xiàng)工作中開發(fā)的技術(shù)不僅適用于OCT應(yīng)用，而且也適用于其他微觀系統(tǒng)，如共聚焦、多光子和光聲成像，其中體積成像速度的加速將是有益的。簡而言之，這項(xiàng)工作為開發(fā)具有持續(xù)高空間分辨率和緊湊體積的快速體積成像系統(tǒng)提供了前景。