假病毒是指一種反轉(zhuǎn)錄病毒整合了另外一種病毒的囊膜糖蛋白,從而形成的具有外源性病毒囊膜,而基因組仍保持著反轉(zhuǎn)錄病毒本身基因組特性的病毒。假病毒用帶有一種病毒外膜蛋白基因的質(zhì)粒與帶有另一種病毒骨架基因的質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染到包裝細(xì)胞(如293T細(xì)胞)中,外膜蛋白基因在包裝細(xì)胞表面表達(dá)出外膜蛋白,另一種病毒的基因在包裝細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄翻譯組裝成病毒顆粒,病毒顆粒出芽時(shí)會(huì)被細(xì)胞表面表達(dá)的外膜蛋白所包裝,即形成假病毒。假病毒具有以下優(yōu)勢(shì):
①具有單輪感染特性,生物安全性較高。
假病毒核酸分子上編碼囊膜蛋白的基因被修飾掉,因此不具備自我復(fù)制能力,只能進(jìn)行單一周期的侵染,不能再組裝成病毒顆粒。
②在系統(tǒng)中可引入報(bào)告基因,便于檢測(cè)和分析。
可引入的報(bào)告基因主要有分泌型胎盤(pán)磷酸酯酶(SEAP)、β一半乳糖苷酶(Lac Z)、β一葡萄糖苷酸酶(GUS)、螢火蟲(chóng)熒光素酶(LUC)和綠色熒光蛋白(GFP)等,便于進(jìn)行定性和定量分析。
③制備過(guò)程相對(duì)簡(jiǎn)單快速,降低了病毒變異,減少了檢測(cè)時(shí)間。
④宿主范圍廣泛、易被濃縮成高滴度、穩(wěn)定性及轉(zhuǎn)染效率高。
在研究致病性高,并目不易體外培養(yǎng)的病毒時(shí),制備假病毒是一種行之有效的、安全的、可信的方法。假病毒通常被用于病毒與宿主細(xì)胞間相互關(guān)系檢測(cè)、受體鑒定、中和抗體效價(jià)評(píng)價(jià)及基因治療等方面研究。綜上所述假病毒用來(lái)研究是非常方便快捷的,因此假病毒的保存是需要解決的問(wèn)題之一。假病毒用于檢測(cè)試劑的冷凍干燥和貯藏過(guò)程中,很多因素如化學(xué)成分、凍結(jié)速率、凍結(jié)和脫水應(yīng)力、玻璃化轉(zhuǎn)變溫度、干燥固體中剩余水分、貯藏環(huán)境的溫度和濕度等都會(huì)影響其中活性組分的穩(wěn)定性甚至?xí)?dǎo)致失活。假病毒試劑,都需要添加合適的冷凍干燥保護(hù)劑和添加劑,也就是所謂的凍干賦形劑,配制成混合液后,才能進(jìn)行有效的冷凍干燥和貯藏。因此,凍干的假病毒試劑檢測(cè)方法的開(kāi)發(fā)、凍干保護(hù)劑的開(kāi)發(fā)、
篩選及有效組合,還有凍干工藝曲線的方法開(kāi)發(fā)及優(yōu)化都是客觀存在且亟需解決的問(wèn)題。假病毒全基因組質(zhì)控品能從采樣步驟開(kāi)始質(zhì)控檢測(cè)全流程,并且是穩(wěn)定的凍干珠形式。其他假病毒也都可以做成凍干粉、凍干珠的形式。假病毒凍干的方法和其他試劑樣本凍干的原理都是差不多的,也要篩選相應(yīng)的保護(hù)劑、凍干曲線。各種靶基因的假病毒都可以開(kāi)發(fā)成凍干形式進(jìn)行保存或者配合試劑盒進(jìn)行使用、運(yùn)輸、貯存等。各種形式樣品凍干技術(shù)開(kāi)發(fā),凍干配方開(kāi)發(fā)、凍干曲線開(kāi)發(fā),凍干樣品評(píng)價(jià)生產(chǎn)放大技術(shù)、各種微生物凍干、制劑凍干、藥品凍干等。
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