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施啟樂(lè)(廣州)儀器有限公司
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在生物實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常需要倒平板,初學(xué)者往往倒不好,導(dǎo)致后繼實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)問(wèn)題。今天,小施總結(jié)幾點(diǎn)倒平板小技巧供大家參考。
培養(yǎng)基傾注溫度
1、培養(yǎng)基傾注適宜溫度約45℃。如果手心接觸裝培養(yǎng)基的三角瓶不燙,手背接觸燙,此時(shí)的溫度在45度左右,適合倒平板。培養(yǎng)基傾注時(shí)溫度太高的話,凝固時(shí)間較長(zhǎng),另外皿蓋上會(huì)有大量冷凝水,不利于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。溫度太低,則容易出現(xiàn)倒板過(guò)程中瓶中培養(yǎng)基部分凝固的現(xiàn)象。如果要連續(xù)倒多個(gè)皿,尤其是在冬天,非常容易凝固,一旦凝固則需要再加熱到較高溫度才能溶化。所以建議此時(shí)開(kāi)個(gè)50度的恒溫水浴,隨時(shí)可把裝培養(yǎng)基的三角瓶放進(jìn)去加熱,效果會(huì)更好。
2、有些培養(yǎng)基需要加入添加成分,這些添加成分在加入前應(yīng)先放置到室溫,避免冷的液體造成瓊脂凝結(jié)或形成片狀物。
3、目前多數(shù)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基滅菌后會(huì)放置水浴或者烘箱中,需使用的時(shí)候拿出來(lái)直接倒板。但培養(yǎng)基靜置時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),靜置時(shí)間一般不超過(guò)4小時(shí)。靜置時(shí)間過(guò)長(zhǎng),培養(yǎng)基中瓊脂可能會(huì)少量凝固,形成類(lèi)似絮狀析出。
培養(yǎng)皿中有冷凝水
培養(yǎng)皿中有冷凝水,如果只有幾滴,則影響不大,如果過(guò)多則需要引起注意。
1、倒皿前將平皿最好保持在35℃-40℃的溫度(觸手有溫?zé)岣校?/span>
2、當(dāng)需要表面接種時(shí),有冷凝水的平板表面容易產(chǎn)生蔓延菌落。這時(shí)可放在有對(duì)流的無(wú)菌凈化臺(tái)中吹干培養(yǎng)基表面,但不能過(guò)度干燥,否則培養(yǎng)過(guò)程中平板容易開(kāi)裂。
3、如果是進(jìn)行傾注平板計(jì)數(shù),則可在凝固后的瓊脂表面再覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基即可。
平板傾注量
一般平板傾注量在18-20mL左右,如果培養(yǎng)時(shí)間超過(guò)48小時(shí)或者是培養(yǎng)溫度高于40℃,為防止水分過(guò)量蒸發(fā)導(dǎo)致平板開(kāi)裂,傾注量一般是25mL左右。傾注平皿時(shí)左三圈、右三圈的輕輕晃動(dòng),注意避讓平皿蓋。
平板氣泡
倒板過(guò)程中容易出現(xiàn)氣泡,特別是像BS瓊脂這類(lèi)需要搖勻后倒板的培養(yǎng)基。氣泡過(guò)多的話會(huì)影響結(jié)果觀察,所以在實(shí)驗(yàn)操作中盡量避免或減少氣泡。
1、加熱時(shí)培養(yǎng)基融化即可,避免溫度過(guò)高產(chǎn)生氣泡。
2、倒平板時(shí)盡量貼著平皿壁緩慢倒入,將氣泡留在瓶子底部。
3、如果平板中有少量氣泡的話,可以把氣泡輕搖到平板壁上,這樣不會(huì)影響結(jié)果觀察。