滅菌重點介紹-液體篇
在日常實驗室的工作中,無論從事哪種實驗方向都會與滅菌產(chǎn)生交集。滅菌的樣本范圍大體包括以下幾種:液體(培養(yǎng)基)、固體(實驗器材器械)、廢棄物(固體廢棄物為主)。不同類型的樣品需要使用不同的滅菌程序,不同程序之間的滅菌方法也不盡相同,所采用的技術(shù)和工藝也有極大差異。本次我們主要來討論液體樣品的滅菌重點。
液體滅菌經(jīng)常會存在以下幾個問題:
1.裝載培養(yǎng)基的瓶蓋需要保留空隙,不能密閉。
2.培養(yǎng)基滅菌后用于培養(yǎng)標(biāo)的物達不到很好的培養(yǎng)效果。
3.滅菌之后培養(yǎng)基的裝載容器破碎、炸裂。
4.培養(yǎng)基降溫之后液面下降濃度改變。
以上幾個問題都是經(jīng)常被忽略的技術(shù)點:
1.瓶蓋保留空隙是為了在降溫階段瓶內(nèi)的蒸汽可以逸出來進行蒸發(fā)冷卻。
2.培養(yǎng)基滅菌后達不到好的滅菌效果,主要是因為培養(yǎng)基是液體,液體的比熱容大升降溫速度較慢,熱量需要蒸汽經(jīng)過容器傳導(dǎo)到培養(yǎng)基中。一般滅菌器的溫度探頭通常固定在腔體內(nèi)部頂端,當(dāng)高溫蒸汽接觸到溫度傳感器時立即開始計算滅菌時間,但由于液體樣品的升溫延遲,培養(yǎng)基沒有經(jīng)歷一個完整的滅菌循環(huán)就開始降溫,對培養(yǎng)基的滅菌效果有影響。也有用戶會相應(yīng)增加滅菌的時長,由于沒有對樣品真實溫度的精確把控,隨意增加滅菌時間又會讓樣本長時間保持在高溫下使內(nèi)部營養(yǎng)物質(zhì)焦糖化,造成實驗假陰性。
3.容器破碎、炸裂主要是因為泄壓時樣品內(nèi)外部壓差變化過快從而導(dǎo)致容器破損。
4.液面下降是因為在冷卻時蒸發(fā)走全部都是培養(yǎng)基的水分。
以上問題的根本原因主要體現(xiàn)在以下4點:
1.無法探知樣品的真實溫度。
2.無法探知培養(yǎng)基是否經(jīng)歷了一個完整的滅菌循環(huán),并且達到了有效的滅菌效果。
3.壓力下降過快。
4.蒸發(fā)導(dǎo)致的液體損失。
Systec高壓滅菌器配備了PT-100柔性溫度探頭,通過放置對比瓶的方法實時探知樣品的真實溫度,在液體達到121℃之后開始計算滅菌時間,在降溫過程中升高壓力保證液體全程不沸騰無液體損失。
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