乙型肝炎病毒（HBV）共價(jià)閉合環(huán)狀 DNA（covalently closed circμLar DNA，cccDNA）是乙肝病毒前基因組 RNA 復(fù)制的原始模板，雖含量較少，每個(gè)肝細(xì)胞內(nèi)只有約 5～50 個(gè)拷貝，但對(duì)乙肝病毒的復(fù)制以及感染狀態(tài)的建立具有十分重要的意義，只有清除了 cccDNA，才能*消除乙肝患者病毒攜帶狀態(tài)。為此乙型肝炎病毒ccc DNA（HBV-cccDNA）熒光PCR

乙型肝炎病毒ccc DNA(HBV-cccDNA)熒光PCR試劑盒試劑盒【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒采用探針?lè)▽?shí)時(shí)熒光 PCR 技術(shù)，設(shè)計(jì)一對(duì)乙型肝炎病毒ccc DNA特異性引物，結(jié)合一條特異性探針，用熒光 PCR 技術(shù)對(duì)乙型肝炎病毒ccc DNA的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，用于臨床上對(duì)病原學(xué)輔助診斷。

 

【儲(chǔ)存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融少于 7 次，有效期 12 個(gè)月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。

說(shuō)明：不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用。

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1.1 DNA 提取

1) 對(duì)上述處理好的標(biāo)本加入等體積核酸提取液（固體標(biāo)本加入50μL 核酸提取液）， 100℃恒溫處理 10min，13,000 rpm 離心 5min，取上清液轉(zhuǎn)移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存；

2) DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

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2. 檢測(cè)方法的局限性

a. 樣本檢測(cè)結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān)；

b. 樣本提取過(guò)程中沒(méi)有控制好交叉污染，會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果；

c. 陽(yáng)性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏，會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果；

d. 病原體在流行過(guò)程中基因突變、重組，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

e. 不同的提取方法存在提取效率差異，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

f. 試劑運(yùn)輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果；

g. 本檢測(cè)結(jié)果僅供參考，如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段。

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1.1 結(jié)果判斷

陽(yáng)性：檢測(cè)通道 Ct 值≤35.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線。

可疑：檢測(cè)通道 Ct 值>35.0，且出現(xiàn)典型擴(kuò)增曲線的樣本建議重復(fù)試驗(yàn)，重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn) Ct 值≤35.0 和典型擴(kuò)增曲線者為陽(yáng)性，否則為陰性。

陰性：樣本檢測(cè)結(jié)果無(wú) Ct 值且無(wú)明顯的擴(kuò)增曲線。

 

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