流感嗜血桿菌(Hi)熒光PCR核酸檢測試劑盒?
流感嗜血桿菌的一種疾病,該病感染可能表現(xiàn)亞臨床癥狀,伴有較低的死亡率和產(chǎn)蛋率下降,會引起肝脾腫大綜合征和大肝大脾病等,因此靈敏快捷的診斷產(chǎn)品具有重要的意義。本產(chǎn)品基于PCR原理開發(fā)。它具有下列特點(diǎn):
一站式,用于不需要單獨(dú)準(zhǔn)備每種成分,包括引物和對照。
根據(jù)流感嗜血桿菌的保守基因序列設(shè)計的引物,具有良好的特異性。
基于染料法qRT-PCR檢測,靈敏度比常規(guī)RT-PCR高10-100倍,可以達(dá)到至少1000拷貝/反應(yīng)。
使用一管式qRT-PCR技術(shù),RT和PCR兩步在一個試管內(nèi)完成,不需要中間轉(zhuǎn)移樣品,降低了操作誤差和可能的污染。
本產(chǎn)品足夠50次30μL體系的RT-PCR,只能用于科研,不能用于臨床。
成 份 十孔盒包裝
2×qRT-PCR 緩沖液 500 μL(棕色管)
10×qRT-PCR酶混合液 100 μL(紅蓋)
ROX染料I 50 μL(棕色管)
ROX染料II 50 μL(棕色管)
熒光PCR模板稀釋液 1mL(亮黃蓋)
流感嗜血桿菌RT-PCR引物混合液 100 μL(白蓋)
流感嗜血桿菌?RT-PCR陽性對照
(1×10E8拷貝/μL) 50 μL(黃蓋)
核酸釋放劑試用裝 20次(1mL,綠蓋)
低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為12個月。陽性對照需要因易污染其他成分需要單獨(dú)放置。本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供DNA段作為陽性對照。
成分 N+2個制備所得樣品 RT-PCR陰性對照 RT-PCR陽性對照(2-7管)
2×qRT-PCR 10μL 10μL 各10μL
緩沖液
口蹄疫病毒RT-PCR 2μL 2μL 各2μL
引物混合物
50×ROX (見注) 0.4μL 0.4μL 各0.4μL
樣品制備所得RNA模板 5.6μL 不加 不加
(來于第8步)
稀釋所得6個陽性對照 不加 不加 各5.6μL(2號樣到2
(來于第6步) 號管,3號樣到3號管…)
10×qRT-PCR 2μL 2μL 2μL
酶混合液
注:需使用ROX染料I的機(jī)型:ABI Prism7000、7300、7700、7900HT、Step-One、Step-One Plus。
需使用ROX染料II的機(jī)型::ABI Prism 7500、7500Fast、MJ Research的Chromo4、Opticon(II)Corbett Rotor Gene 3000。
不需要使用ROX的機(jī)型:Thermal Cycle Dice Real Time System, LightCycler、Smart Cycler System、Agilent Mx3000P、RotorGene 3000、RotorGene 6000。
上機(jī)后按下面參數(shù)進(jìn)行RT-PCR(參數(shù)可能會因儀器不同而需優(yōu)化)。
如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的log值為橫軸,以Ct值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品DNA濃度的log值,再推算出其濃度。
如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照Ct必須大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴(kuò)增曲線,Ct值應(yīng)該小于或等于30。對待測樣品,如果其Ct大于或等于40則為陰性,如果小于或等于35則為陽性。如果在35-40之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的Ct值如果大于或等于40則為陰性,如果小于40,則為陽性。
流感嗜血桿菌(Hi)熒光PCR核酸檢測試劑盒?
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