登革熱病毒4型（DFV-IV）熒光PCR檢測(cè)試劑盒針對(duì)登革熱病毒4型（DFV-IV）基因高度保守區(qū)基因序列設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針。在反應(yīng)體系中含登革熱病毒4型（DFV-IV）基因組模板的情況下，PCR反應(yīng)得以進(jìn)行并釋放 熒光信號(hào)。利用熒光定量PCR儀對(duì)PCR過程中相應(yīng)通道的信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和輸出，實(shí)現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果的定性、定量分析。

登革熱病毒4型(DFV-IV)熒光PCR檢測(cè)試劑盒說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：登革熱病毒4型(DFV-IV)核酸擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒(PCR 熒光探針法)

Name ：Dengue virus type 4 (DFV-IV) nucleic acid amplification kit (PCR fluorescence probe method)

【包裝規(guī)格】48T/盒

【預(yù)期用途】

本試劑盒適用于檢測(cè)全血等樣本中的登革熱病毒4型(DFV-IV)，用于登革熱病毒4型(DFV-IV)感染的輔助診斷，其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒用一對(duì)登革熱病毒4型(DFV-IV)特異性引物，結(jié)合一條特異性探針，用熒光 PCR 技術(shù)對(duì)登革熱病毒4型(DFV-IV)的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。

【試劑組成】

名 稱 規(guī) 格

核酸提取液 1.5ml×2 管

酶液 50μl×1 管

YP 反應(yīng)液 1.0ml×1 管

YP 陽(yáng)性質(zhì)控品 50μl ×1 管

陰性質(zhì)控品 250μl ×1 管

說明：不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用。

【儲(chǔ)存條件和有效期】

試劑盒保存于-20±5℃，有效期 12 個(gè)月；

避免反復(fù)凍融，凍融次數(shù)不超過 5 次；試劑開瓶后，在室溫條件下放置時(shí)間不

應(yīng)超過 8 小時(shí)；運(yùn)輸采用干冰（或者冰袋）保持低溫，運(yùn)輸時(shí)間不應(yīng)超過 4 天。試

劑盒生產(chǎn)日期見產(chǎn)品標(biāo)簽。

【適用儀器】

ABI 7300、7500、ABI stepone / stepone plus 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ Opticon2 等其他熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。

【標(biāo)本要求】

標(biāo)本采集：用注射器取血 5mL 至 EDTA-2Na 抗凝管

保存運(yùn)輸：上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長(zhǎng)期保存可置-70℃，但不能超過6個(gè)月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

【使用方法】

1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

取抗凝血下層血細(xì)胞 50uL，加入 100uL 雙蒸水吹勻

1.2DNA 提取

1) 對(duì)上述處理好的標(biāo)本加入等體積核酸提取液（固體標(biāo)本加入50uL核酸提取液），100℃恒溫處理 10 分鐘，13,000 rpm 離心 5 分鐘，取上清液轉(zhuǎn)移至新的 1.5ml EP 管，-20℃保存；

2) DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的 DNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

2. 試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性

對(duì)照+1 管陽(yáng)性對(duì)照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：

3. 加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的 DNA、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μl，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

4. PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）

4.1 將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；

4.2 設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25ul；

熒光通道選擇： 檢測(cè)通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，請(qǐng)勿選擇 ROX 參比熒光。

4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

0141粘附性大腸桿菌(EAEC)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

0131出血性大腸桿菌(EHEC)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

0121大腸桿菌(O157:H7)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

5. 結(jié)果分析判定

5.2結(jié)果判斷

陽(yáng)性：檢測(cè)通道 Ct 值≤35.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線；

可疑：檢測(cè)通道 35.0<Ct 值≤37，建議重復(fù)檢測(cè)，如果檢測(cè)通道仍為 35.0<Ct

值≤37，且曲線有明顯的增長(zhǎng)曲線，判定為陽(yáng)性，否則為陰性；

陰性：樣本檢測(cè)結(jié)果 Ct 值>37 或無 Ct 值。

7. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：無明顯擴(kuò)增曲線或無 Ct 值顯示；

陽(yáng)性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期，且 Ct 值≤32；

以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則實(shí)驗(yàn)視為無效。

8. 產(chǎn)品性能指標(biāo)

陰陽(yáng)性參考品符合率：8 份陽(yáng)性參考品符合率為 100％；10 份陰性參考品符合

率為 100％。

低檢測(cè)限：2.0×102copies/ml。

精密度：批內(nèi)、批間精密度檢測(cè) Ct 值的變異系數(shù)（CV）均≤3%。

公司優(yōu)勢(shì)：
1）質(zhì)量：我司提供的的試劑為世界
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此外公司還提供：

0211沙門氏菌(Spp)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

0171致病性大腸桿菌(EPEC)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

0161產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌(ETEC)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

0151侵襲性大腸桿菌(EIEC)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T