生物透射電鏡(TEM)利用電子束作光源,用電磁場作透鏡,經(jīng)加速和聚集的電子束投射到非常薄的樣品上,形成明暗不同的影像,TEM在中和物理學和生物學相關的許多科學領域都是重要的分析方法,如基礎醫(yī)學研究、病毒學、材料科學、以及納米技術、半導體研究等等。
透射電子顯微鏡的分辨率比光學顯微鏡高的很多,分辨力可達0.2nm,200-200k倍之間連續(xù)可調(diào); 可以用于觀察樣品的精細結構,甚至可以用于觀察僅僅一列分子的結構。
生物透射電鏡送樣運輸要求:
以下所有樣本必須盡量新鮮,固定液或懸浮液都不得冷凍結冰!
1、動物組織樣本
①1-3min內(nèi)取樣,取樣組織2mmX2mm大小,盡量薄。如來不及修整組織大小可先于電鏡固定液內(nèi)固定半小時左右待組織變硬以后再修整組織進行后固定。超出此范圍后組織會無法*固定,后續(xù)實驗無法完成,務必請重視此過程。
②取材時盡量精確到需要觀察的目的部位(如觀察腎小球取腎皮質(zhì);觀察胰島取胰島豐富的胰尾;皮膚,腸胃等在固定液中易打卷的組織可將組織粘在濾紙上進行固定)。
③取材時一定注意避免鑷子擠壓等機械損傷,刀片要鋒利避免挫傷組織。
④組織取下后立即投入電鏡固定液內(nèi)室溫固定2h,再轉(zhuǎn)移至4°保存,4°冰袋運輸,在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結冰。4°時樣本可保存1個月左右。
2、植物組織樣本
①取材要求同動物組織樣本。
②組織投入固定液后需要進行真空抽氣讓組織沉底,如無條件抽氣可用濾紙將組織塞進固定液內(nèi),組織不能漂浮在固定液表面。
3、細胞樣本
貼壁細胞
方法一:
①培養(yǎng)好的細胞棄培養(yǎng)基,加入2.5%的常溫戊二醛固定液。
②常溫固定5min左右,用細胞刮(或軟橡膠蓋切得平整小方塊)沿一個方向輕輕刮下細胞,切記不要反復刮,避免細胞刮破。
③用巴氏吸管把細胞液吸入離心管內(nèi),放入離心機(不超過3000轉(zhuǎn)),離心2min左右,細胞團要有綠豆大小。
④棄固定液后加新的電鏡固定液,把細胞團輕輕挑起,懸浮于固定液中。室溫避光固定30min,再轉(zhuǎn)移至4°保存,4°冰袋運輸,在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結冰。
方法二:(對細胞形態(tài)沒有要求的)
①培養(yǎng)好的細胞棄培養(yǎng)基,加入胰mei。
②胰mei消化好后(時間不宜過長),用培養(yǎng)基終止消化,用吸管把細胞吹下來。吸入離心管,離心(不超過3000轉(zhuǎn)),2min左右,細胞團要有綠豆大小。
③棄上清,加入2.5%的常溫戊二醛固定液,把細胞團輕輕挑起,懸浮于固定液中。
④室溫避光固定30min,再轉(zhuǎn)移至4°保存,4°冰袋運輸,在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結冰。
懸浮細胞:離心收集細胞要肉眼可見細胞沉淀綠豆大小,棄培養(yǎng)基后加電鏡固定液室溫固定2h,再轉(zhuǎn)移至4°保存,4°冰袋運輸,在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結冰。
4、細菌樣本
長于固體培養(yǎng)基的細菌:連帶著培養(yǎng)基一起挑下細菌放于電鏡固定液內(nèi)室溫固定2h,再轉(zhuǎn)移至4°保存, 4°冰袋運輸,在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結冰。
懸浮細菌孢子等:離心收集細菌要肉眼可見細菌沉淀綠豆大小,棄培養(yǎng)基后加電鏡固定液室溫固定2h,再轉(zhuǎn)移至4°保存,4°冰袋運輸,在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結冰。
5、病毒
破碎組織細胞,粗離心去除細胞碎片取上清,超速離心分離出病毒(病毒提取的過程需要客戶自己完成)。用緩沖液(如PBS)懸浮病毒,遠距離-80°凍存運輸,近距離4°保存運輸,盡快滴片做負染后及時電鏡觀察拍照。
6、外秘體囊泡等
客戶自己完成外秘體囊泡等的提取收集,用緩沖液(如PBS)或者試劑盒中的保存液懸浮,遠距離-80°凍存運輸,近距離4°保存運輸,盡快制片做負染后及時電鏡觀察拍照。(因此類樣品極易降解,樣品越新鮮越好,最好數(shù)小時內(nèi)完成滴片負染,否則做出的效果很不理想甚至*觀察不到)。
7、納米材料等無機材料
直接準備粉劑或用緩沖液(如PBS)懸浮,常溫保存運輸即可(需要超聲的備注)。做負染后電鏡觀察拍照。
注意事項:
1.拍照需要求簡潔清楚,有側重點。需附參考圖或參考文獻(如有特殊要求請?zhí)崆皞渥⒄f明)。
2.拍照倍數(shù)由參考文獻效果圖來確定(不同機器不同廠家倍數(shù)標準不同,不能互通參考)。
3.圖片本身左下角附有拍照倍數(shù)(X-K 單位千倍),右下角附有標尺(十格總長即為標尺所注長度)。
毓秀生物科技(上海)有限公司是一家專注于生物科技前沿技術研發(fā)和科研技術服務的公司,公司建有專業(yè)的分子生物學、細胞生物學、組織病理學實驗室,為眾多生物醫(yī)藥企業(yè)、科研機構、醫(yī)院及高校提供分子生物學、細胞生物學、病理形態(tài)學等方面科研服務。公司核心團隊曾在國內(nèi)外許多優(yōu)秀學府從事過多年研發(fā)工作,秉承“為客戶創(chuàng)造價值,為員工實現(xiàn)夢想,為社會創(chuàng)造財富"的經(jīng)營理念,堅持以技術創(chuàng)新為先導,以服務質(zhì)量為根本,為中國生物醫(yī)藥和科學研究提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術服務。