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固相萃取裝置常見問題及五大案例分析
閱讀：3773 發(fā)布時間：2019-3-27
固相萃取操作過程中經常會遇到篩板堵塞固相萃取裝置、流速緩慢、凈化效果不理想、重現性差以及回收率不理想等問題，本文擬針對上述問題進行簡單分析，并例舉一些實驗過程中遇到的案例，提供發(fā)現問題和解決問題的方法，與各位老師一起探討學習。
1、篩板堵塞
常見的固相萃取柱通常由柱管、篩板和填料3部分組成，其中篩板是一種具有多孔結構的材料，起到固定填料和過濾溶液的作用。
當上樣液中含有較多顆粒雜質時，這些顆粒雜質會在篩板上不斷聚集，在篩板上端形成一層顆粒層，隨著壓力的增加以及時間的延長，顆粒層會越來越嚴實，終導致篩板*堵死，溶液無法通過固相萃取柱。
遇到這種情況，可以在上樣前先高速離心或者過濾，然后取上清液或者濾液過固相萃取柱，減少顆粒雜質的影響。
例如食品中人工合成著色劑的測定，當樣品為飲料、配制酒等液體時，過聚酰胺固相萃取柱或者G3垂融漏斗還是很輕松的，而當樣品為糕點固相萃取裝置、谷物制品以及果凍時，上樣前需先高速離心或者過濾，否則就很容易出現篩板堵塞的現象。
2、流速緩慢
固相萃取過程中流速不能太快，流速太快不利于目標化合物在填料上的保留以及溶劑與目標化合物或者填料的相互作用，從而影響保留或者洗脫過程。當然流速也不能太慢，否則會大大延長前處理的時間。
固相萃取過程中導致流速緩慢的原因有：
(1)樣品粘度高，例如食品中遇到濃縮汁、糖果時，需要對樣品充分稀釋，降低上樣液的濃度；
(2)填料較多或者太緊密，此時需要增強負壓或者減少填料的使用量；
(3)溶劑極性不匹配，例如SN/T1924-2011中淋洗固相萃取柱時，先用水、甲醇，接著用正己烷淋洗，正己烷與前兩者的極性不同，從而導致流速很慢，遇到這種情況，可以增加負壓或者選用合適的溶劑進行過渡。
3、凈化效果不理想
通常固相萃取柱有兩種凈化模式，一種是采用保留目標化合物的模式，另一種是采用保留雜質的模式，不管采用哪種模式都需要選擇合適的填料，使得目標化合物或者雜質能吸附在填料中，同時不需要保留的組分盡可能多的隨著溶劑一同流出固相萃取柱。
在保留化合物模式下凈化樣品時，通常會經歷上樣、淋洗和洗脫三個步驟。淋洗和洗脫溶劑選擇的不合適也會使得凈化效果不理想。
例如淋洗液洗脫強度太弱，淋洗時不能將雜質淋洗掉，或者洗脫液的強度太強，洗脫時將雜質一并洗脫下來，這兩種情況均會導致凈化效果不理想。
由此可見，采用固相萃取柱凈化樣品時，填料、淋洗液和洗脫液的選擇尤為重要。當遇到一些復雜樣品，一種填料不能滿足凈化效果時，可以選擇串聯(lián)固相萃取柱或者采用混合填料的方式進行操作。
4、重現性差
固相萃取中重現性差通常與產品質量、流速以及操作有關。固相萃取柱中填料的質量、均勻性和松緊度都可能影響到方法的重現性，因此選擇質量可靠的廠家很重要，遇到重現性差的實驗，可以選擇用標準溶液考察一下固相萃取柱的重現性。
固相萃取過程中流速的快慢也是影響重現性的重要因素之一，上樣、淋洗、洗脫過程中適當降低流速，通常而言，流速低于5mL/min時結果較為穩(wěn)定，有些實驗可能需要更慢的流速。當然，操作者水平的高低也會影響到結果的重現性。
例如，通常上樣前需要活化固相萃取柱，上樣過程中不能讓填料干涸，濃縮過程不能有損失，復溶的時候需要充分溶解等等，這些都與操作技能息息相關。
5、回收率不理想
在實驗中，操作者關注較多的可能也是關于加標回收率的問題，固相萃取柱質量的優(yōu)劣、固相萃取方法是否合適、操作者操作技能的高低都可以通過加標回收實驗進行驗證。原則上加標回收率應在80%~120%之間，當然對于多組分目標物同時檢測時，這一指標可適當放寬。
回收率的問題通常體現在以下3個方面：
(1)目標物沒有回收；
(2)目標物的回收率較低；
(3)目標物的回收率過高。
遇到上述情況時，需要對固相萃取過程進行排查，找到問題后對癥下藥，對實驗方法就行修正。如何才能找到問題，其實不難。
在一次完整的固相萃取過程中，目標化合物只可能存在于樣品的流出液、淋洗液、洗脫液和填料中，我們只需要對這3種液體逐個測定，便能發(fā)現問題。