薄層色譜分析(TLC)是快速分離分析少量物質(zhì)的一種很重要的實驗技術(shù)，主要用于藥品的鑒別、 雜質(zhì)檢查，也用于跟蹤化學(xué)反應(yīng)進程。

薄層色譜法基本原理

薄層色譜法是一種吸附薄層色譜分離法，它利用各成分對同一吸附劑吸附能力不同，使在流動相（溶劑）流過固定相（吸附劑）的過程中，連續(xù)地產(chǎn)生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，從而達到各成分互相分離的目的。

薄層色譜法基本原理

薄層色譜法經(jīng)典操作

01 點樣

點樣一般為圓點（不能太大）點樣基線距底邊0.5~1.0 cm，點樣直徑為1-2 mm 點間距離約為0.5~1.0 cm，點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜；

02 展開

1、化合物分離效率大小用 Rf（化合物距離基線的距離除以溶劑的前沿距基線的距離 ）值表達，Rf值最-好在0.15~0.85之間，盡量控制主要物質(zhì)Rf值在0.3~0.7之 間。

2、展開劑的選擇：常用的溶劑組合有：石油醚/乙酸乙酯、二氯甲烷/甲醇、石油醚/丙酮、石油醚/二氯甲烷、乙酸乙酯/甲醇、乙酸乙酯/四氫呋喃、氯仿/乙酸乙酯 、乙睛/水等。

03 顯色

遵循：一看、二照、三碘、四顯。首先在日光下觀察，劃岀有色物質(zhì)的斑點位置； 在紫外燈下觀察有無暗斑或熒光斑點；紫外吸收很弱的物質(zhì)，可以用碘缸進行顯色 無色又無紫外吸收且在碘缸中不顯色的物質(zhì)，可以根據(jù)化合物的顯色基團選擇顯色劑顯色。

薄層色譜法案例分析

01 薄層色譜法TLC拖尾現(xiàn)象

① 首先考慮的是樣品濃度過大，硅膠板過載導(dǎo)致。這種情況直接降低樣品濃度或者減少上樣量。

② 樣品對硅膠的吸附能力過強導(dǎo)致的拖尾。對不同體系加入不同的調(diào)節(jié)劑，酸體系加冰醋酸，堿體系加氨水/三乙胺。

薄層色譜法TLC拖尾現(xiàn)象

02 薄層色譜法TLC邊緣效應(yīng)

原因：當展開劑在薄層上展開時，極性較弱的展開劑和揮發(fā)較強的展開劑在薄層兩邊較易揮發(fā)，它們在薄層兩側(cè)的濃度比在中部的濃度小，因此產(chǎn)生了邊緣效應(yīng)。

解決方案：點樣時，板子兩邊空出0.5 cm邊際

03 薄層色譜法TLC分離效果差

原因：分離效果差的主要原因包括展開劑的選擇、展開方式以及實驗環(huán)境條件。

解決方案：根據(jù)樣品的性質(zhì)選擇合適極性/體系的展開劑；避免點樣過量或不均勻；優(yōu)化展開方式，選擇最-適合的上行或下行展開方式；控制實驗環(huán)境的溫濕度，確保硅膠不吸潮。

04 薄層色譜法TLC樣品跑散/沖頂

原因：可能是樣品中有大極性溶劑、展開劑極性太大、硅膠板吸潮。

解決方案：在點板前，先用吹風機將硅膠板吹干，點樣后，再將樣品溶劑吹干，選用極性適合的展開劑。

原因：可能包括展開劑選擇不佳、樣品濃度過低、顯色劑選擇不當?shù)取?/span>

解決方案：

① 展開劑選擇不佳，可能導(dǎo)致斑點重合或不明顯?？蓢L試不同類型、比例的展開劑，多次嘗試以找到最-佳的展開劑組合。

② 調(diào)整樣品的濃度，以便在薄層色譜板上形成更明顯的斑點。

③ 選擇正確的顯色劑對樣品的顯色起到至關(guān)重要的作 用，如含氮（伯、仲）化合物選用茚三酮顯色劑，含還原性基團化合物（羥基、氨基 、醛）選用高猛酸鉀顯色劑，生物堿選擇硫酸鈰顯色劑等。

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