重組生物技術(shù)制備的單克隆抗體（以下簡稱重組單抗）是生物制品中一類重要的藥物類別。近年來，由于其精確的靶向殺傷和中和等生物學(xué)效應(yīng)，重組單抗在腫瘤、自身免疫性疾病等方面受到了廣泛的研究和應(yīng)用，并且在神經(jīng)學(xué)、眼科學(xué)等其他疾病領(lǐng)域的研究也開始逐步發(fā)展起來。目前，國內(nèi)生產(chǎn)的重組單抗主要采用真核細胞培養(yǎng)表達的方法，在工藝研發(fā)和質(zhì)量研究方面，藥品企業(yè)對主要有效成分的結(jié)構(gòu)研究和質(zhì)量控制關(guān)注較多，但是對產(chǎn)品組成中的雜質(zhì)和相關(guān)物質(zhì)研究較少或關(guān)注度不夠。考慮到這些雜質(zhì)或相關(guān)物質(zhì)是重組單抗產(chǎn)品中的重要組成部分，將會影響到產(chǎn)品的質(zhì)量、臨床應(yīng)用的安全性和有效性。
本方法主要采用CAPEL-205高效毛細管電泳儀測定重組治療性單克隆抗體（免疫球蛋白G，IgG）中產(chǎn)物的相關(guān)雜質(zhì)，參照的是美國藥典第129章(Analytical Procedures for Recombinant Therapeutic Monoclonal Antibodies, Capillary SDS electrophoresis) 中的方法，也可以參照中國藥典2015版三部三部通則3127（ 單抗分子大小變異體測定法）中的方法。
1測試條件
USP129.還原條件
BGE：按照USP 129 中的凝膠條件
毛細管電泳: Ltot = 30 cm, ID= 50 µm
樣品進樣: -5 kV x 20 sec
電壓: -15 kV
室溫: 25 ОС
檢測波長: 220 nm
樣品: 重組IgG制劑
IS – 內(nèi)標
LC – 輕鏈
NG – 非糖基化重鏈
HC – 重鏈
USP129.非還原條件
BGE：按照USP 129 中的凝膠條件
毛細管電泳: Ltot = 30 cm, ID= 50 µm
樣品進樣: -5 kV x 20 sec
電壓: -15 kV
室溫: 25 ОС
檢測波長: 220 nm
樣品：重組IgG制劑
IS - 內(nèi)標
F1-F8 - IgG相關(guān)雜質(zhì)（片段）
IgG - 完整抗體
2測試結(jié)果
圖1 還原條件下的檢測色譜圖
圖2 非還原條件下的 檢測色譜圖
3結(jié)論
采用CAPEL-205高效毛細管電泳儀測定重組治療性單克隆抗體（免疫球蛋白G，IgG）中產(chǎn)物的相關(guān)雜質(zhì)，可以實現(xiàn)的IgG產(chǎn)物中的相關(guān)雜質(zhì)的有效分離，方法準確、靈敏度高、重現(xiàn)性好，可以滿足日常分析要求。
4配置列表
| 儀器配置 | CAPEL-205毛細管電泳系統(tǒng)，裝有WINDOWS®XP/ 7/8/10操作系統(tǒng)的筆記本電腦 |
| ELFORUN軟件工作站 |
Capel-205毛細管電泳儀的優(yōu)勢特點
通過施加高壓電場，基于毛細管液體樣本組成成分遷移速度的差別。應(yīng)用UV吸收檢測技術(shù)，在毛細管出口應(yīng)用高精度光學(xué)系統(tǒng)定量檢測分離出的組分
光源：高強度氘燈，優(yōu)化光學(xué)設(shè)計保證低檢出限
可實現(xiàn)多種不同分析方法和分離模式，毛細管區(qū)帶電泳，毛細管膠束電動色譜，毛細管等電聚集，毛細管凝膠電泳，毛細管等速電泳
全自動進樣，進樣方式可選電動及壓力進樣。壓力進樣，步進值1mbar，*高99mbar；電動進樣，電壓范圍：步進值1kV，1-25kV可調(diào)
毛細管冷卻：恒溫水冷系統(tǒng)，環(huán)境溫度5-50℃可調(diào)；恒溫水冷保證溫度控制更加精細和準確，提高分析效果（相對與風(fēng)冷，冷卻效果更優(yōu)/與液冷相比，成本更低）
標準離心管1.5mL(Eppendorf型)適用于所有樣本分析
擴展的全自動進樣器，高達59個進樣位，允許提供自動過夜分析功能
*全自動開口進樣設(shè)計，避免揮發(fā)和交叉污染
新型高壓模塊提供±30kV壓力，保證超優(yōu)的分析效率和快速分析時間
采用流動電位控制技術(shù)，極大提高重現(xiàn)性，尤其是分析復(fù)雜樣品更具優(yōu)勢
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