　　1.選擇SPE固相萃取小柱或?yàn)V膜　首先應(yīng)根據(jù)待測(cè)物的理化性質(zhì)和樣品基質(zhì), 選擇對(duì)待測(cè)物有較強(qiáng)保留能力的固定相。若待測(cè)物帶負(fù)電荷, 可用陰離子交換填料, 反之則用陽(yáng)離子交換填料。若為中性待測(cè)物, 可用反相填料萃取。SPE 小柱或?yàn)V膜的大小與規(guī)格應(yīng)視樣品中待測(cè)物的濃度大小而定。對(duì)于濃度較低的體內(nèi)樣品, 一般應(yīng)選用盡量少的固定相填料萃取較大體積的樣品。

　　2.活化　萃取前先用充滿小柱的溶劑沖洗小柱或用5～ 10ml 溶劑沖洗濾膜。一般可先用甲醇等水

　　溶性有機(jī)溶劑沖洗填料, 因?yàn)榧状寄軡?rùn)濕吸附劑表面, 并滲透到非極性的硅膠鍵合相中, 使硅膠更容易

　　被水潤(rùn)濕, 之后再加入水或緩沖液沖洗。加樣前, 應(yīng)使SPE 填料保持濕潤(rùn), 如果填料干燥會(huì)降低樣品保固相萃取技術(shù)方法固相萃取技術(shù)方法留值; 而各小柱的干燥程度不一, 則會(huì)影響回收率的重現(xiàn)性。

　　3.上樣　一般可采取以下措施:

　　(1) 用0.1mol/L酸或堿調(diào)節(jié),使pH<3或pH>9,離心取上層液萃?。?br />

　　(2) 用甲醇、乙腈等沉淀蛋白質(zhì)后取上清液,以水或緩沖液稀釋后萃??；

　　(3) 用酸或無(wú)機(jī)鹽沉淀蛋白質(zhì)后取上清液,調(diào)節(jié)pH 值后萃取；

　　(4) 超聲15min后加入水、緩沖液,取上清液萃取。尿液樣品中的藥物濃度較高,加樣前先用水或緩沖液稀釋,必要時(shí)可用酸、堿水解反應(yīng)破壞藥物與蛋白質(zhì)的結(jié)合,然后萃取。流速應(yīng)控制為1ml/min,流速快不利于待測(cè)物與固定相結(jié)合。

　　4.淋洗　反相SPE的清洗溶劑多為水或緩沖液,可在清洗液中加入少量有機(jī)溶劑、無(wú)機(jī)鹽或調(diào)節(jié)pH值。加入小柱的清洗液應(yīng)不超過(guò)一個(gè)小柱的容積,而SPE濾膜為5～10ml。

　　5.洗脫待測(cè)物　應(yīng)選用5～10ml離子強(qiáng)度較弱但能洗下待測(cè)物的洗脫溶劑。若需較高靈敏度,則可先將洗脫液揮干后,再用流動(dòng)相重組殘留物后進(jìn)樣。體內(nèi)樣品洗脫后多含有水,可選用冷凍干燥法。保留能力較弱的SPE 填料可用小體積、較弱的洗脫液洗下待測(cè)物,再用極性較強(qiáng)的HPLC 分析柱如C18柱分析洗脫物。若待測(cè)物可電離,可調(diào)節(jié)pH 值,抑制樣品離子化,以增強(qiáng)待測(cè)物在反相SPE 填料中的保留,洗脫時(shí)調(diào)節(jié)pH值使其離子化并用較弱的溶劑洗脫,收集洗脫液后再調(diào)節(jié)pH值使其在HPLC分析中達(dá)到*分離效果。在洗脫過(guò)程中應(yīng)減慢流速,用兩次小體積洗脫代替一次大體積洗脫, 回收率更高。

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SPE固相萃取小柱工作原理