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現(xiàn)有凍存方法存在的問(wèn)題：

1、DMSO對(duì)細(xì)胞存在一定的毒性，用量受到限制，降低或者不使用DMSO，尋找其它替代物是比較的選擇。

2、血清，即使是純化得到的白蛋白，由于其動(dòng)物來(lái)源的特性，會(huì)極大增加帶來(lái)病毒等感染物質(zhì)的可能。而且，血清來(lái)源受限，價(jià)格昂貴，所以其使用也必然會(huì)受到越來(lái)越多的限制。因此，尋找替代血清的非滲透性保護(hù)劑也顯得尤為必要。

3、目前，成熟和穩(wěn)定的凍存細(xì)胞技術(shù)是將加有保護(hù)劑的細(xì)胞懸液置于-196℃液氮中，這樣可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而保持細(xì)胞的特性，在需要的時(shí)候經(jīng)過(guò)復(fù)蘇程序，使得細(xì)胞重新生長(zhǎng)增殖以用于實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞儲(chǔ)存在-196℃液氮中，理論上儲(chǔ)存時(shí)間是無(wú)限的，但是液氮凍存步驟繁瑣，需要經(jīng)過(guò)程序降溫，如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘，然后移至-20℃冰箱30分鐘，再移至-80℃冰箱保存16-18個(gè)小時(shí)（或隔夜），最后才移至液氮罐中進(jìn)行長(zhǎng)期的儲(chǔ)存。（其中需要注意的是-20℃條件下不可超過(guò)1個(gè)小時(shí)，以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量的死亡。）

賽爾瑞成科學(xué)家團(tuán)隊(duì)在細(xì)胞凍存領(lǐng)域進(jìn)行了大量研究工作，分別于2015年研發(fā)了 “Cellregen無(wú)血清細(xì)胞凍存液”（貨號(hào)：CF0101） 和2020年研發(fā)了 “無(wú)血清低DMSO細(xì)胞凍存液”（貨號(hào)：CF0201；申請(qǐng)?zhí)枺?02010307890.6）。這兩款凍存液均是不含血清，含DMSO，非程序降溫、可-80℃長(zhǎng)期冷凍保存的通用型細(xì)胞凍存液 ，區(qū)別在于“Cellregen無(wú)血清細(xì)胞凍存液”（貨號(hào)：CF0101）的DMSO含量為10%， “無(wú)血清低DMSO細(xì)胞凍存液”（貨號(hào)：CF0201）DMSO的含量為5%，產(chǎn)品均獲得了廣大科研工作者的喜愛。

鑒于某些類型的細(xì)胞對(duì)DMSO敏感，使用含DMSO的細(xì)胞凍存液可能會(huì)影響細(xì)胞的功能，賽爾瑞成繼續(xù)研究工作，開發(fā)出一款無(wú)血清、無(wú)DMSO、無(wú)毒性、非程序降溫、-80℃可長(zhǎng)期冷凍保存的凍存液體系：CRD0無(wú)血清無(wú)DMSO細(xì)胞凍存液（貨號(hào)：CF0301）。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1、高安全性，不含血清及動(dòng)物源成分，病毒、霉菌和支原體等污染可能性低，各批產(chǎn)品之間有更高的產(chǎn)品質(zhì)量一致性。
2、無(wú)DMSO，對(duì)細(xì)胞無(wú)潛在的毒性作用。
3、細(xì)胞存活率高，無(wú)批次差異。
4、凍存液配方，可直接使用，方便簡(jiǎn)捷。
5、可直接存放于-80℃冰箱凍存，無(wú)需經(jīng)過(guò)費(fèi)時(shí)的程序降溫過(guò)程（省時(shí)、省力、省錢），不需要采用程序降溫儀，更不需要放置在-196℃液氮。
6、可原位凍存，比如雜交瘤細(xì)胞的亞克隆，可以大規(guī)模減少工作量，避免污染。

CRD0無(wú)血清無(wú)DMSO細(xì)胞凍存液凍存效果：

圖1. 3T3細(xì)胞復(fù)蘇后細(xì)胞狀態(tài)圖                

         3T3細(xì)胞存活率>90%    

圖2. ATDC5細(xì)胞復(fù)蘇后細(xì)胞狀態(tài)圖

       ATDC5存活率>90%

圖3 小鼠脾臟T細(xì)胞復(fù)蘇后細(xì)胞凋亡圖  

三個(gè)批次復(fù)蘇率均>95%，且批次間凍存效果無(wú)明顯差異

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